[發明專利]畢赤酵母菌優化的虹鱒魚抗菌肽、含有其的表達載體、菌株及應用

在審

• 申請號: 201310370580.9
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103667300A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 羅琳;姜娜;馬志宏;李鐵梁;邢薇
• 申請（專利權）人: 北京市水產科學研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;A61K48/00;A61K38/17;A61P31/04;C12R1/84
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 梁揮

1.一種畢赤酵母菌優化的虹鱒魚抗菌肽hepcidin基因及其片段，其如SEQ?ID?NO：1及SEQ?ID?NO：2所示。

2.一種虹鱒魚抗菌肽的表達載體，其含有SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示的序列，所述表達載體為pGAPZαA-hep，具有圖5所示的圖譜；或pGAPZαA-mhep，具有圖5所示的圖譜；或pPICZαA-hep，具有圖6所示的圖譜；或pPICZαA-mhep，具有圖6所示的圖譜。

3.一種重組畢赤酵母菌株，GS115/pGAPZαA-hep或GS115/pGAPZαA-mhep，其含有SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示的序列。

4.一種重組畢赤酵母菌株，KM71H/pPICZαA-hep或KM71H/pPICZαA-mhep，其含有SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示的序列。

5.一種制備重組畢赤酵母菌株的方法，包括：

將SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示序列的基因經過XhoI酶及XbaI酶雙酶切，可操作地連接質粒pGAPZαA或pPICZαA，得到質粒pGAPZαA-hep/mhep或pPICZαA-hep/mhep；

將質粒pGAPZαA-hep/mhep或pPICZαA-hep/mhep轉化到畢赤酵母GS115或KM71H中，得到重組菌株GS115/KM71H/pGAPZαA/pPICZαA-hep或GS115/KM71H/pGAPZαA/pPICZαA-mhep。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述轉化為電轉化。

7.根據權利要求5所述的方法，其中重組菌株進行誘導表達的誘導時間為72h。

8.權利要求1所述的基因或其片段在抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和魚類致病菌如副溶血弧菌1.2164、維氏氣單胞菌X-1-06909、嗜水氣單胞菌HA-336、維氏氣單胞菌CL0901活性中的應用。

9.權利要求2所述的表達載體pGAPZαA-hep、pGAPZαA-mhep、pPICZαA-hep或pPICZαA-mhep在抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和魚類致病菌如副溶血弧菌1.2164、維氏氣單胞菌X-1-06909、嗜水氣單胞菌HA-336、維氏氣單胞菌CL0901活性中中的應用。

10.權利要求3或4所述的重組畢赤酵母菌株GS115/pGAPZαA-hep、GS115/pGAPZαA-mhep、KM71H/pGAPZαA-hep或KM71H/pGAPZαA-mhep在抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和魚類致病菌如副溶血弧菌1.2164、維氏氣單胞菌X-1-06909、嗜水氣單胞菌HA-336、維氏氣單胞菌CL0901活性中的應用。