[發明專利]新型等溫多自配引發擴增技術(IMSA)

有效

• 申請號: 201310370202.0
• 申請日: 2013-08-23
• 公開（公告）號: CN104388581B
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 馬學軍;丁雄;聶凱;許文波;石磊
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

1.一種利用改進的等溫多自配引發擴增方法檢測病原微生物的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括用于等溫核酸擴增方法的四條混合式引物兩條非混合式引物，以及羥基萘酚藍染料或羥基萘酚藍染料與GeneFinder ^TM的混合染料，

其中，當所述檢測病原微生物為手足口病病原柯薩奇病毒A16時，所述四條混合式引物的序列分別為：

CVA16-DsF:5’TTGTCACTAGCATTAGACGACGCCAGATTAGGCACTGGTGTTG3’;

CVA16-DsR :5’CAGGAGACAGCCATTGGGACGTGGTGGGCATTGTGA3’;

CVA16-FIT:5’T GGAATGATGGTTCAACACACATCTAAGCCGCGGAGACAGG3’;

CVA16-RIT :5’AGATGTGTGTTGAACCATCATTCCACTGACAAGACCAGCACGG3’;

兩條非混合式引物的序列分別為：

CVA16-SteR：5’ TTGTCACTAGCATTAGACGACGC3’;

CVA16-SteF :5’CAGGAGACAGCCATTGGGA3’，

所述引物CVA16-DsF和引物CVA16-DsR組成的引物對：所述引物CVA16-FIT和所述引物CVA16-RIT組成的引物對：引物CVA16-SteR和引物 CVA16-SteF組成的引物對=1 ：4 ：8；

當所述檢測病原微生物為人腸道病毒 EV71 時，所述四條混合式引物的序列分別為：

EV71-DsF:5’ ACCATTGATAAGCACTCGCAGGGTCAAGCTGTCAGACCCTCC3’;

EV71-DsR:5’ GAACACAAACAGGAGAAAGATCTTGTGAGAACGTGCCCATCA3’;

EV71-FIT :5’TCCGAATGTGGGATATCCGTCATAAGTTTCAGTGCCATTCATGTC

EV71-RIT:5’ TTATGACGGATATCCCACATTCGGAAGGACATGCCCCGTATT3’,

兩條非混合式引物的序列分別為：

EV71-SteR :5’ACCATTGATAAGCACTCGCAGG3’

EV71-SteF:5’GAACACAAACAGGAGAAAGATCTTG3’,

所述引物EV71-DsF 和所述引物 EV71-DsR組成的引物對：所述引物EV71-FIT和所述引物 EV71-RIT組成的引物對：所述引物EV71-SteR和所述引物 EV71-SteF組成的引物對 =1：4 ：8；

當所述檢測病原微生物為人甲型 H7N9 流感病毒的 HA 基因時，

所述四條混合式引物的序列分別為：

H7-DsF:5’ GCCTGATTCTCTGAGAATTTGCCTTGATGTCTGTTATCCTGGGA3’;

H7-DsR:5’ ACAGTGGAATAAGAACTAATGGAGCGAGCCATTTCATTTCTGCA3’;

H7-FIP:5’ GAATCCCATTGCTTCCTTGTCACGTGAATGAAGAAGCTCTG3’;

H7-RIT :5’TGACAAGGAAGCAATGGGATTCTCCTGATCTCCTACATGCA3’;

兩條非混合式引物的序列分別為：

H7-SteR:5’ GCCTGATTCTCTGAGAATTTGCCT3’;

H7-SteF:5’ ACAGTGGAATAAGAACTAATGGAGC3’，

所述引物H7-DsF和 H7-DsR組成的引物對：所述引物H7-FIP和所述引物 H7-RIT組成的引物對：所述引物H7-SteR和所述引物 H7-SteF組成的引物對 =1 ：4。