[發明專利]建立梳唇石斛離體持續開花體系的方法

有效

• 申請號: 201310369919.3
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103392608A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 何俊;張雪梅;程治英;李德銖
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明協立知識產權代理事務所(普通合伙) 53108
• 代理人: 馬曉青

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，具體地，涉及一種建立梳唇石斛離體持續開花體系的方法。

背景技術：

梳唇石斛（DendrobiumstrongylanthumRchb.f.）又名圓花石斛，是著名中藥“石斛”的原植物之一，藥材名為吊蘭楓斗。舞臺藝人用它做飲料，可以滋嗓潤喉，久唱音佳。該物種是受保護的蘭科植物中極小種群植物，極顯珍貴。中國西南野生生物種質資源庫植物離體庫成功地保存了瀕危滅絕的該物種，為其開展深入研究和持續利用提供了平臺。

迄今，現有技術中未見有成功建立一種重復性好、持續開花3年以上的梳唇石斛離體實驗模式系統的報道。

發明內容：

本發明旨在發明一種建立梳唇石斛離體持續開花體系的方法，該方法重復性好，梳唇石斛已持續開花3年以上。

為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案：

建立梳唇石斛離體持續開花體系的方法，取梳唇石斛外植體，進行離體培養，培養溫度為25±2℃，光照強度為20μmol/（m²·s），光照12h/d，基本培養基為1/2MS，誘導叢芽產生花序、花序切段培養及營養生長和生殖生長相互轉換的培養基為1/2MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+S3%或1/2MS+NAA0.5mg/L+PPP₃₃₃0.2mg/L+S2%或1/2MS+NAA0.5mg/L+Ac0.05%+S2%，所有培養基PH值為5.8，加5.6g/L瓊脂固化。

如所述的方法，所述的梳唇石斛外植體為無菌試管叢芽。

如所述的方法，所述的花序切段長2-3cm，培養10瓶，6個切段/瓶。

如所述的方法，所述每組試驗供試叢芽瓶數為10瓶，6叢/瓶，3-4芽/叢，重復3次。

如所述的方法，所述的1/2MS為MS培養基大量元素減半，其余成分不變。

如所述的方法，所述的誘導叢芽產生花序、花序切段培養及營養生長和生殖生長相互轉換的培養基優選1/2MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+S3%。

與現有技術相比，本發明具備如下的優益性：

通過利用梳唇石斛無菌叢芽，進行離體培養，建立梳唇石斛離體持續開花體系，該方法重復性好。在滿足花序切段培養所需的營養和激素的條件下，花序切段可持續開花達3年以上。本發明建立的梳唇石斛離體持續開花模式將為深入研究植物細胞分裂素和生長素在花芽形成、營養生長和生殖生長相互轉換中的作用提供材料。

具體實施方式：

下面用本發明的實施例來進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此來限定本發明。

實施例1：

1、材料與方法：

1.1供試材料：系用2007年采自云南騰沖的野生梳唇石斛材料建立的無菌無性系，并以試管叢芽形式保存在中國西南野生生物種質資源庫植物離體庫內。具體方法為：梳唇石斛（DendrobiumstrongylanthumRchb.f.）外植體來源于其果實內種子，先將果實在純乙醇中沾一下，然后在酒精燈上燒后用于接種，通過種子萌發常規培養獲得無菌無性系、無菌試管叢芽。

1.2方法：離體庫培養室培養溫度為25±2℃，光照強度為20μmol/（m²·s），光照12h/d?；九囵B基為1/2MS(MS為Murashige&Skoog，1962；1/2MS為MS培養基大量元素減半，其余成分不變)。誘導叢芽產生花序、花序切段培養及營養生長和生殖生長相互轉換的培養基為：①1/2MS+BA0.5mg/L（單位下同）+NAA0.2+S3%；或②1/2MS+NAA0.5+PPP₃₃₃0.2+S2%；或③1/2MS+NAA0.5+Ac0.05%+S2%。所有培養基PH值為5.8，加5.6g/L瓊脂固化。每組試驗供試材料叢芽瓶數為10瓶，6叢/瓶，約4芽/叢，重復3次。叢芽誘導花序數的百分率計算：以每瓶叢芽出現的花序數與接種叢芽總數的比值來計算?；ㄐ蚯卸闻囵B：花序切段長2-3cm，培養10瓶，6個切段/瓶。

2.1誘導叢芽離體開花培養基的選擇