[發(fā)明專利]一株熒光假單胞菌及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310368621.0
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103396972A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 牛贍光;楊光菊;田龍軍;鄧松華;楊治家
• 申請（專利權(quán)）人: 牛贍光;楊光菊
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C05F11/08;C05G3/00;C12R1/39
• 代理公司: 濟南誠智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于解磷微生物肥料領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一株能夠高效解磷細(xì)菌熒光假單胞菌及其用途，以及采用該熒光假單胞菌制備的生物磷肥。

背景技術(shù)

磷是植物細(xì)胞中遺傳物質(zhì)DNA和能量物質(zhì)ATP的基本構(gòu)成元素，在植物的整個生命過程中起著重要的作用，磷是植物生長發(fā)育的必需元素之一，高能磷酸鍵是能量的載體，植物的光合作用和體內(nèi)的生化過程都必須有磷參加。磷既是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要物質(zhì)保證，又是不可再生的礦質(zhì)資源。我國耕地土壤中全磷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般在0.2～1.1g/kg（土）之間變動，許多土壤磷素供應(yīng)不足，因此利用解磷微生物定向地調(diào)節(jié)土壤磷素狀況和提高磷肥利用率是達(dá)到作物高產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良的重要途徑之一。

熒光假單胞菌是革蘭氏陰性好氧細(xì)菌類群，它包含了極其多樣化的一群微生物。該屬中有許多是致病菌，能引起人、動物及植物發(fā)病。但也有相當(dāng)一部分屬于有益菌，尤其在植物根圍部分所篩選到的具有生防活性的細(xì)菌絕大部分屬于假單胞菌屬。這類細(xì)菌營養(yǎng)需求簡單，在自然界中分布廣泛。熒光假單胞菌屬于假單胞菌屬的rRNA同源組I，桿狀，具有極生鞭毛、化能異養(yǎng)型。與該屬下其它種類的典型區(qū)別在于能產(chǎn)生水溶性的黃綠熒光色素。

細(xì)菌溶磷機理非常復(fù)雜，有些細(xì)菌溶磷主要是質(zhì)子起作用，有些主要是有機酸起作用，而有些菌株則兩種機制都存在，還有些菌株由于生長過程中產(chǎn)生其它的螯合物質(zhì)，從而導(dǎo)致磷礦粉的溶解。充分利用解磷微生物這一特性，不僅可以利用固定態(tài)、吸附態(tài)的磷，有效緩解土壤中缺磷的現(xiàn)狀，而且對提高磷肥利用率，減少磷肥的使用所造成的環(huán)境污染，甚至對提高作物產(chǎn)量及其品質(zhì)，都具有重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于高效解磷細(xì)菌——熒光假單胞菌菌株pt4。本發(fā)明的熒光假單胞菌菌株具有生長速度快、解磷能力強、抗逆性強，在植物根際能夠快速大量定殖等特點，因此具有良好的應(yīng)用前景。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種采用該新的熒光假單胞菌制備的能夠高效解磷的微生物菌劑。

本發(fā)明所提供的菌株為熒光假單胞菌（Pseudomonas?fluorescens）pt4，是從湖北省洪湖市土壤中分離獲得的，已于2013年5月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所），保藏號為CGMCC?No.7597。其具有以下生物學(xué)特性：在NA培養(yǎng)基上，在30℃培養(yǎng)時，菌落較規(guī)則，邊緣較整齊，表面光滑較濕潤，不凸起，半透明，顏色為淡黃色。菌體呈直桿狀，（0.5～1.0）μm×（1.5～5.0）μm，革蘭氏染色陰性，產(chǎn)生熒光色素、不產(chǎn)生類胡蘿卜素和膿青素；可以利用檸檬酸鹽，對青霉素有抗性；氧化酶、接觸酶和精氨酸雙水解酶陽性，明膠液化、吲哚反應(yīng)陽性，水解淀粉、反硝化、V-P反應(yīng)陰性。

本發(fā)明熒光假單胞菌（Pseudomonas?fluorescensis）菌株pt4的培養(yǎng)方法或繁殖方法包括：

（1）普通培養(yǎng)保存采用NA培養(yǎng)基（Nutrient?agar），配方：0.5%蛋白胨，0.3%牛肉膏，0.5%NaCl，1.5%瓊脂，蒸餾水，pH調(diào)至7.0。

（2）實驗室液體培養(yǎng)采用NA培養(yǎng)基：0.5%蛋白胨，0.3%牛肉膏，0.5%NaCl，蒸餾水，pH調(diào)至7.0。

（3）種子罐液體發(fā)酵培養(yǎng)基，配方：玉米粉15g，葡萄糖4g，豆餅粉21g，魚粉4g，CaCO₃9g，(NH₄)₂SO₄1.5g，K₂HPO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O0.1g，NaCl0.1g，水1000mL，pH調(diào)至7.5。

（4）大量發(fā)酵培養(yǎng)基同種子罐液體發(fā)酵培養(yǎng)基。

本發(fā)明還提供一種能夠高效解磷的微生物菌劑，所述微生物菌劑含有所述的熒光假單胞菌（Pseudomonas?fluorescensis）菌株pt4。

本發(fā)明還提供了上述熒光假單胞菌（Pseudomonas?fluorescensis）菌株pt4或者微生物菌劑在提高磷肥的利用率，改善土壤結(jié)構(gòu)，提高作物的產(chǎn)量及品質(zhì)方面的應(yīng)用。

上述微生物菌劑的制備方法，包括：

（1）搖瓶培養(yǎng)：將活化好的熒光假單胞菌菌株pt4接種到裝有NA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，30℃200r/min振蕩培養(yǎng)12h；