[發(fā)明專利]一種以柑橘幼子的落果為原料生產(chǎn)檸檬苦素類提取物的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310367815.9
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103417691A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖文軍;熊碩;秦昱;滕杰
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A61K36/752
• 分類號: A61K36/752;A61K131/00
• 代理公司: 長沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種分離純化柑橘幼子落果中檸檬苦素類化合物的綠色化學(xué)工藝技術(shù)，尤指一種采用HP-20大孔吸附樹脂分離純化柑橘幼子落果中檸檬苦素類化合物的綠色方法。

背景技術(shù)

柑橘屬蕓香科柑橘屬植物，為世界的第一大水果，2006年我國柑橘種植面積達171.4萬hm²，年產(chǎn)量高達1900萬噸，分居世界第1位和第2位。每年柑橘生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生數(shù)以萬噸計的落果，落果樹可占到總小果樹的60%-85%，但柑橘的落果資源很容易被人忽視。如果充分利用柑橘的落果，從中提取并分離純化檸檬苦素類物質(zhì)等活性成分，就能充分保證柑橘落果中有效成分的開發(fā)利用，并對有效保護環(huán)境和提高柑橘綜合利用價值有重大意義。因此，從柑橘落果中提取這些活性物質(zhì)，不僅能變廢為寶，提高柑橘的生產(chǎn)價值，造福果農(nóng)，對于我國柑橘產(chǎn)業(yè)的持續(xù)發(fā)展也具有積極地促進作用。

檸檬苦素類化合物為一類三萜類物質(zhì)，是植物次生代謝產(chǎn)物，主要存在于蕓香科和楝科等植物中，柑橘中的檸檬苦素類化合物是柑橘產(chǎn)生苦味的主要原因之一。自1989年發(fā)現(xiàn)檸檬苦素類物質(zhì)具有激活谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性的功能以來，人們對其生物活性進行了大量研究，發(fā)現(xiàn)檸檬苦素類物質(zhì)具有抗癌活性、昆蟲拒食作用以及鎮(zhèn)痛、抗炎、抗焦慮、鎮(zhèn)靜等作用。

目前，文獻報道分離純化檸檬苦素類物質(zhì)的方法主要有有機溶劑提取法、重結(jié)晶和分布結(jié)晶法、硅膠柱層色譜、薄層色譜、大孔吸附樹脂法及制備型高效液相色譜法等。有機溶劑提取法是目前國內(nèi)外制備檸檬苦素類物質(zhì)使用最廣泛的方法，比較容易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。劉君用不同的有機溶劑提取檸檬苦素類物質(zhì)，發(fā)現(xiàn)氯仿的效果最好，其次為丙酮和乙腈。王青山采用浸提脫脂，確定石油醚（60-90℃）為脫脂溶劑，利用丙酮為抽提溶劑進行索氏提取。王青山對香柚種子的丙酮提取物進行結(jié)晶法分離，選用二氯甲烷/異丙醇混合體系分離出檸檬苦素晶體。談宗華利用酶解法提取檸檬籽中檸檬苦素類物質(zhì)，并將提取液用AB-8樹脂柱層析，洗脫液進行硅膠色譜柱層析，可得到含量90%以上的檸檬苦素類物質(zhì)。何中燕從16種大孔吸附樹脂中篩選出了最適合檸檬苦素類物質(zhì)分離純化的HPD-722大孔吸附樹脂，得到的固形物中檸檬苦素類物質(zhì)含量>30%，并申請了專利。

雖然，上述方法能夠制備得到具有一定純度和得率的檸檬苦素類提取物，但是由于受到技術(shù)手段的限制以及加工過程中使用了大量的有毒有機溶劑或化學(xué)制劑，使得產(chǎn)品明顯存在安全性欠佳、產(chǎn)品的品質(zhì)和市場競爭力不足等缺陷。

而大孔吸附樹脂分離純化方法具有工藝簡單、再生方便、經(jīng)濟環(huán)保、安全綠色等優(yōu)點，近年來，已經(jīng)成為眾多天然產(chǎn)物分離純化常用的手段。但是，樹脂類型的不同，會對檸檬苦素類物質(zhì)的吸附與解析效果產(chǎn)生很大的差距，因此篩選出一種對檸檬苦素類物質(zhì)具有良好吸附與解析效果的樹脂具有重大意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高效、綠色安全、低成本、高得率、高純度、適用于工業(yè)生產(chǎn)的以柑橘幼子的落果為原料生產(chǎn)檸檬苦素類提取物的方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種以柑橘幼子的落果為原料生產(chǎn)檸檬苦素類提取物的方法，包括以60%-80%體積濃度的食用乙醇于60-70℃從柑橘幼子的落果中回流提取檸檬苦素類粗提物；其特點是：還包括將上述檸檬苦素類粗提物以HP-20大孔吸附樹脂分離純化：將所述粗提物配制成檸檬苦素類物質(zhì)濃度為4.0-5.0mg/mL的溶液，將此溶液以2-3.5BV/h的流速通過裝有HP-20大孔吸附樹脂的層析柱進行吸附及解析分離，待吸附飽和后，先用蒸餾水以3.0-5.0BV/h的流速沖洗樹脂至無色，再用70%-80%體積濃度的食用乙醇以2-3BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫液，將洗脫液在-0.07～-0.09MPa、45-55℃條件下濃縮，回收食用乙醇，真空冷凍干燥，即可。

上述以60%-80%體積濃度的食用乙醇于60-70℃從柑橘幼子的落果中回流提取檸檬苦素類粗提物是指：取柑橘幼子的落果于50-60℃烘干后粉碎，用60%-80%體積濃度的食用乙醇，按1g落果粉加8-15ml食用乙醇的比例，在60-70℃下回流提取2.0-3.0h，提取次數(shù)為1-2次，過濾，所得粗濾液離心（轉(zhuǎn)速為3000-4000r/min、時間為5-15min），取上清液；將上清液在-0.07～-0.09MPa、45-55℃條件下濃縮，回收食用乙醇溶劑，即得粗提物。