[發明專利]評估肝細胞癌臨床分期和預后的試劑盒及ECSCR 的應用

有效

• 申請號: 201310366861.7
• 申請日: 2013-08-21
• 公開（公告）號: CN103389376A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 楊連粵;李雪冬
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N1/28
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 吳貴明;張永明

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體而言，涉及一種評估肝細胞癌臨床分期和預后的試劑盒及ECSCR的應用。

背景技術

肝細胞癌在全球，尤其在東亞地區是最常見的惡性腫瘤之一，其發病率居惡性腫瘤的第六位，且近年來仍呈上升趨勢。肝癌具有預后惡劣、死亡率高等特點，其每年的死亡病例數與新發病例數之比接近1:1，高居全世界癌癥死因的第三位。中國正是肝癌的高發區，據國際癌癥中心統計，每年肝癌新發病例的一半左右發生在中國，我國男性的肝癌死亡率為37.9/10萬，女性為14.2/10萬，均居全球首位（A.Jemal,F.Bray?and?M.M.Center,et?al.,Global?cancer?statistics.CA?Cancer?J?Clin,2011.61（2）:69～90）。而且，肝癌患者術后5年內的復發轉移率高達70%，而術后5年生存率僅為30%～50%，甚至更低（A.Forner,J.M.Llovet?and?J.Bruix,Hepatocellular?carcinoma.Lancet,2012.379（9822）:1245～1255）。可見肝癌術后的復發轉移嚴重地制約了肝癌患者長期生存率的提高，是導致肝癌死亡率居高不下的最主要原因。因此，深入研究探討肝癌復發轉移相關的分子標志物，不僅為肝癌患者的治療和預后評估帶來益處，也可為開發新的靶向治療藥物提供依據。因此，尋找并確立肝癌復發轉移相關的新的分子標志物，具有重要的理論和現實意義。

新近發現的ECSCR（Endothelial?Cell-Specific?Chemotaxis?Regulator，內皮細胞特異性趨化調節因子）分子是一個單程跨膜糖蛋白，廣泛表達于哺乳動物的內皮細胞和血管組織，具有高度保守的胞質尾區，并與并與細胞骨架重排，EGF受體信號傳導，以及蛋白酶體活性等密切相關（F.Ma,D.Zhang?and?H.Yang,et?al.,Endothelial?cell-specific?molecule2（ECSM2）modulates?actin?remodeling?and?epidermal?growth?factor?receptor?signaling.Genes?Cells,2009.14（3）:281～293）。已有研究表明，ECSCR能夠促進細胞凋亡，增強細胞粘附，抑制細胞遷移運動和血管生成（K.Ikeda,R.Nakano?and?M.Uraoka,et?al.,Identification?of?ARIA?regulating?endothelial?apoptosis?and?angiogenesis?by?modulating?proteasomal?degradation?of?cIAP-1and?cIAP-2.Proc?Natl?Acad?Sci?USA,2009.106（20）:8227～8232）。ECSCR可能與肝癌的腫瘤生物學行為密切相關。

然而，目前關于ECSCR的研究尚局限于胚胎發育領域，而在人肝癌中是否存在ECSCR的表達，其陽性表達有何臨床意義以及在肝癌中ECSCR是如何發揮其生物學作用的等方面仍未見任何相關報道。

發明內容

本發明旨在提供一種評估肝細胞癌臨床分期和預后的試劑盒及ECSCR的應用，以解決現有技術中缺少評估肝細胞癌臨床分期和預后的分子標記的技術問題。

根據本發明的一個方面，提供了一種評估肝細胞癌臨床分期和預后的試劑盒。該試劑盒包括用于特異性檢測ECSCR表達水平或表達模式的試劑。

進一步地，試劑包括用于特異性檢測ECSCR?mRNA表達水平或表達模式的RT-PCR引物。

進一步地，RT-PCR引物的序列為SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2。

進一步地，試劑用于特異性檢測ECSCR所編碼的蛋白的表達水平或表達模式。

進一步地，試劑包括：用于肝癌組織標本石蠟包埋和切片的試劑，用于肝癌組織標本石蠟切片的脫蠟和水化的試劑，用于抗原修復的檸檬酸抗原修復液，用于滅活內源性過氧化物酶的雙氧水，用于封閉的封閉血清，山羊抗人ECSCR蛋白多克隆抗體、辣根酶標記的兔抗山羊IgG抗體，用于顯色的DAB顯色劑和蘇木素，以及用于脫水、透明和封片的試劑。

進一步地，用于肝癌組織標本石蠟切片的脫蠟和水化的試劑包括二甲苯、乙醇及蒸餾水。

進一步地，用于脫水、透明和封片的試劑包括乙醇、二甲苯及PVP封片液。