[發(fā)明專利]一種電化學(xué)基因傳感器法檢測華法林敏感性基因的試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310366835.4
• 申請日: 2013-08-21
• 公開（公告）號: CN103627789A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳華云;李明;肖湘文;趙麗;黃桃生
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種電化學(xué)基因傳感器法檢測華法林敏感性基因的試劑盒，特別是涉及以一種電化學(xué)基因傳感器技術(shù)快速檢測人基因組中華法林敏感性基因的試劑盒。本試劑盒具有很高的靈敏度和特異性。通過本發(fā)明的試劑盒，實(shí)現(xiàn)對人體細(xì)胞、抗凝全血、或組織等樣品中的人基因組中的法林敏感性基因進(jìn)行快速檢測和分析。

背景技術(shù)

1998年底美國科學(xué)促進(jìn)會將電化學(xué)基因傳感器技術(shù)列為1998年度自然科學(xué)領(lǐng)域十大進(jìn)展之一，足見其在科學(xué)史上的意義。它以其可同時、快速、準(zhǔn)確地分析數(shù)以千計(jì)基因組信息的本領(lǐng)而顯示出了巨大的威力。這些應(yīng)用主要包括基因表達(dá)檢測、突變檢測、基因組多態(tài)性分析和基因文庫作圖以及雜交測序等方面。

生物芯片以其高通量、多靶位的檢測模式正在被越來越多地應(yīng)用于生物科學(xué)領(lǐng)域。以印刷電路板為載體的微陣列芯片，更以其高效、高通量、低價(jià)位等特點(diǎn)，已經(jīng)廣泛用于基礎(chǔ)研究和臨床篩查、輔助診斷。

微陣列芯片包括寡核苷酸芯片、cDNA芯片、抗原芯片、抗體芯片等，電化學(xué)基因傳感器芯片以特殊化學(xué)方法處理后的印刷電路板為載體，將各種探針或靶標(biāo)片段以化學(xué)鍵結(jié)合的方式固定在印刷電路板表面，并利用二茂鐵衍生物作為電化學(xué)指示劑，形成可用于雜交反應(yīng)或抗原抗體反應(yīng)的微陣列芯片。

華法林(warfarin)是香豆素類口服抗凝藥，是目前國內(nèi)外最常用的長效抗凝藥，多用于人工瓣膜置換、靜脈血栓形成(肺栓塞)、房顫等的口服抗凝治療。其抗凝效果常以凝血酶原時間(prothrombin?time，PT)及國際標(biāo)準(zhǔn)化比率(international?normalized?ratio，INR)作為監(jiān)測指標(biāo)。目前臨床上華法林的給藥方案通常采用首先給予一定標(biāo)準(zhǔn)劑量，然后臨床醫(yī)生根據(jù)每個患者INR值的情況，增加或減少劑量直至INR達(dá)到靶標(biāo)。但是在這樣的抗凝療法中，調(diào)整劑量的周期較長，患者發(fā)生血栓或出血的可能性較高。

造成華法林用量個體差異的原因很多，可分為非遺傳因素和遺傳因素。非遺傳因素主要有年齡、性別、體表面積、藥物的相互作用、飲食習(xí)慣和疾病狀態(tài)等。然而，非遺傳因素的影響程度較為有限，并非華法林用量個體差異的主要原因。近年來，隨著藥物基因組學(xué)的進(jìn)展和華法林藥理作用分子機(jī)制的闡明，遺傳因素在華法林用量個體差異中的作用越來越受到人們的重視。目前，已知與華法林的藥效學(xué)和藥動學(xué)相關(guān)的基因達(dá)30余種，其中維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合體亞單位1基因(VKORC1)的基因多態(tài)性和細(xì)胞色素P4502C9基因(CYP2C9)是影響華法林用量個體差異最主要的兩個遺傳因素。

VKORC1和CYP2C9是目前所知影響華法林用量個體差異最主要的遺傳因素，已有學(xué)者對這兩個基因在華法林個體差異中的貢獻(xiàn)大小進(jìn)行了研究。這些研究顯示CYP2C9和VKORC1的多態(tài)性對華法林用量個體差異的貢獻(xiàn)比例分別5～22％和6～37％。將VKORC1和CYP2C9的多態(tài)性與非遺傳因素，如年齡、性別、體重、合用藥物和治療疾病等相結(jié)合，可解釋華法林用量個體差異原因的33.3％～60.8％。在中國人群中，Veenstra等報(bào)道VKORC1、CYP2C9、年齡、性別可解釋香港中國人華法林用量個體差異原因的60.8％，其中VKORC1和CYP2C9的貢獻(xiàn)是31％和7.9％。Miao等報(bào)道的另一組中國人中，VKORC1和CYP2C9對華法林用量個體差異的貢獻(xiàn)分別是49.4％和1.7％。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種電化學(xué)基因傳感器法檢測華法林敏感性基因的試劑盒，特別是涉及以一種電化學(xué)基因傳感器技術(shù)快速檢測人基因組中法林敏感性基因的試劑盒。本試劑盒可以檢測人體細(xì)胞、抗凝全血、或組織等樣品中的人基因組中的法林敏感性基因。

本發(fā)明適用于定性檢測人外周血、各種組織和細(xì)胞等臨床樣本中細(xì)胞色素CYP2C9基因*2，*3，*5等位基因型和維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合體1(VKORC1)基因-1639G＞A、1173C＞T等位基因型共5個華法林敏感基因SNP位點(diǎn)。