[發(fā)明專利]一種人基因組DNA24個基因座的復合擴增的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310364183.0
• 申請日: 2013-08-20
• 公開（公告）號: CN103614361A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設計）人: 鄭衛(wèi)國;李發(fā)院;葛斌文;盧青;劉超;劉宏;李越
• 申請（專利權）人: 無錫中德美聯(lián)生物技術有限公司;廣州市刑事科學技術研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌;曹翠珍

技術領域

本發(fā)明涉及一種24個基因座的熒光標記復合擴增檢驗系統(tǒng)，具體是涉及一種同時分析人基因組常染色體及Y染色體基因座的五色熒光標記復合擴增系統(tǒng)，該系統(tǒng)可以應用于個體識別和親子鑒定。

背景技術

短串聯(lián)重復序列基因座（STR）是目前普遍應用的遺傳標記。90年代初STR基因座多態(tài)性的發(fā)現(xiàn)，特別是STR基因座具有片段小容易擴增，適宜于檢驗微量和降解檢材，而且各基因座的擴增條件相似而能夠復合擴增，因而具有靈敏、準確、快速、信息量大等優(yōu)點。尤其是在建立DNA數(shù)據(jù)庫方面，STR復合擴增技術具有極大的優(yōu)越性。因此美國FBI選擇了13個STR基因座用于建立DNA數(shù)據(jù)庫—CODIS（Combined?DNA?Index?System）：CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、vWA。這些STR基因座通常被稱為13個核心基因座。

長期的DNA檢驗實踐表明，短串聯(lián)重復序列基因座的遺傳多態(tài)性在種族間存在一定的差異，各個基因座間差別也很大。隨著DNA數(shù)據(jù)庫的建設，13個基因座數(shù)量不夠。我國的打拐DNA數(shù)據(jù)庫要求要有18個常染色體基因座。2012年美國核心基因座工作組（The?CODIS?Core?Loci?Working?Group）也建議美國FBI把檢測基因座增加到25個，并且增加了一個DYS391。在法醫(yī)檢測中，通常用Amelogenin基因指示性別。這個基因在X、Y染色體上，并且Amelogenin-X上比Amelogenin-Y大6bp，根據(jù)擴增出峰來判定性別，單峰為女性，雙峰為男性。但是存在男性Amelogenin-Y缺失的情況，會造成男性誤判成女性。所以增加了DYS391用于輔助判定性別。

常染色體遺傳標記，例如13個核心STR基因座，在每一子代進行重新組合，這是因為一個個體的遺傳信息一半來自他/她的父親而另一半來自他/她的母親。Y染色體遺傳標記則是父系遺傳，適用于快速排查嫌疑人。

目前，在法醫(yī)檢測中，常染色體分型與Y染色體檢測一般都是分開的。最多在常染色體檢測中加入了DYS391。因為DYS391多態(tài)性差，主要用于輔助性別判定。如果能同時檢測常染色體基因座及多態(tài)性更高的Y染色體基因座，既能用Y染色體基因座信息于嫌疑人的快速排查，又能根據(jù)常染色體基因座信息確定嫌疑人。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明CN201110229325.3提供了一個同時擴增21個常染色體基因座及一個性別基因座的方案。本發(fā)明在201110229325.3方案基礎上，刪除了D2S441、D10S1248，增加了4個Y染色體基因座：3個多態(tài)性高的基因座DYS635，DYS458，DYS456及一個多態(tài)性較差DYS391、一個性別基因座，構成了一個24個基因座的復合擴增體系。同時滿足常規(guī)法醫(yī)檢測及嫌疑人的快速排查。

本發(fā)明的目的之一在于：提供一種通過復合擴增24個基因座來進行個體識別和親子鑒定的熒光標記STR復合擴增檢驗系統(tǒng)，同時檢測19個常染色體基因座、4個Y染色體基因座及一個性別基因座。涉及檢測人基因組中具有多態(tài)性的遺傳標記。本發(fā)明特別涉及用聚合酶鏈式反應在一個體系中同時擴增多個短串聯(lián)重復基因座。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用如下技術方案：

一種人基因組DNA24個基因座的復合擴增的試劑盒，包括有如下24個基因座的引物：

D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta?E、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta?D、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、DYS635、DYS458、DYS456、DYS391及Amelogenin。

上述24個基因座的引物及引物濃度優(yōu)選如下：

表1各個基因座的引物及濃度

進一步地，對于上述每個基因座對應的引物中，至少有一個引物的5’端最好是經(jīng)過標記的，就可以用來對引物的擴增產(chǎn)物進行檢測，標記的方式較多，可以采用化學，放射性，熒光，發(fā)光和熒光共振能量轉移的標記等，最好是采用熒光標記。更優(yōu)的是每個基因座對應的引物中，都有一個引物的5’端是經(jīng)過標記的。