[發明專利]一株高產克拉維酸的棒狀鏈霉菌及其應用

有效

• 申請號: 201310363352.9
• 申請日: 2013-08-20
• 公開（公告）號: CN103468607A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 楊克遷;趙友寶;向四海
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/18;C12R1/465
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明屬于微生物領域，涉及一株高產克拉維酸的棒狀鏈霉菌及其應用。

背景技術

隨著抗生素的大量使用，病原菌耐藥性問題日益嚴重。青霉素、頭孢菌素等β-內酰胺類抗生素的濫用導致部分病原菌產生β-內酰胺酶，從而降解該類抗生素產生耐藥性。克拉維酸（clavulanic?acid），又稱棒酸，是棒狀鏈霉菌（Streptomyces?clavuligerus）產生的次級代謝產物?？死S酸單獨作用時抗菌活性很弱，但它具有獨特的3R，5R立體構像，使其具有光譜的、不可逆的β-內酰酶抑制活性，也是第一個被發現并成功應用于臨床的β-內酰胺酶抑制劑。臨床應用中，克拉維酸常與β-內酰胺類抗生素如阿莫西林（amoxicillin）、替卡西林（ticarcillin）聯合用藥，制成酶抑制劑-抗生素的聯合制劑，可在不同程度上保護β-內酰胺類抗生素不被β-內酰胺酶分解失活，從而提高該抗生素對產酶耐藥菌的抗菌活性，提高臨床療效。由于其重要的臨床應用價值，克拉維酸的市場需求廣大。目前克拉維酸的工業生產主要依靠微生物發酵。因此，改造克拉維酸產生菌獲得高產工程菌具有重要的工業應用價值。

野生型棒狀鏈霉菌的克拉維酸產量很低，遠遠不能滿足工業發酵的需要，所以目前工業應用的菌株往往都是通過多輪物理、化學等誘變篩選得到的誘變株。隨著對克拉維酸生物合成基礎研究的深入，多種理性代謝工程改造手段成功的提高了野生菌株的克拉維酸產量，但還是無法超越工業上廣泛應用的誘變菌株。因此，以工業應用的誘變菌株作為出發菌株，通過代謝工程改造的手段提高其克拉維酸產量具有重要的實際應用價值。

發明內容

本發明的目的是提供一株高產克拉維酸的棒狀鏈霉菌及其應用。

本發明所提供的棒狀鏈霉菌具體為棒狀鏈霉菌（Streptomyces?clavuligerus）16CF10。該菌株是以棒狀鏈霉菌（Streptomyces?clavuligerus）70116為出發菌株，對其進行代謝工程改造，誘變后得到的新菌株。該菌株已于2013年07月12日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所），保藏登記號為CGMCC?No.7915。

本發明的再一個目的是提供一種菌劑。

本發明所提供的菌劑的活性成分為所述棒狀鏈霉菌（Streptomyces?clavuligerus）16CF10?CGMCC?No.7915。

所述棒狀鏈霉菌（Streptomyces?clavuligerus）16CF10?CGMCC?No.7915或所述菌劑在制備克拉維酸中的應用也屬于本發明的保護范圍。

本發明的還一個目的是提供一種制備克拉維酸的方法。

本發明所提供的制備克拉維酸的方法，可包括如下步驟：發酵培養所述棒狀鏈霉菌（Streptomyces?clavuligerus）16CF10?CGMCC?No.7915，收集發酵產物，獲得克拉維酸。

在上述方法中，所述發酵培養的培養基（發酵培養基）的組成如下：黃豆粉20±2g/L，糊精10±1g/L，甘油15±1mL/L，KH₂PO₄0.6±0.1g/L，3-(N-嗎啡啉)丙磺酸（MOPS）8±1g/L，微量元素溶液1±0.2mL/L，余量為水；pH為7.0±0.2；所述微量元素中，溶劑為水，溶質及其濃度如下：FeSO₄·7H₂O1.0±0.2g/L，MnCl₂·4H₂O1.0±0.2g/L，ZnSO₄·7H₂O1.0±0.2g/L，CaCl₂·3H₂O1.3±0.2g/L。