[發明專利]一種水黃皮耐逆相關基因MpSRG及其編碼的蛋白與應用

有效

• 申請號: 201310363323.2
• 申請日: 2013-08-20
• 公開（公告）號: CN103468710A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 鄭易之;黃健子;黃榮峰;陳受宜;張萬科;嚴昊
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N5/10;C07K14/415;A01H5/00
• 代理公司: 深圳市恒申知識產權事務所(普通合伙) 44312
• 代理人: 陳健

技術領域

本發明涉及植物基因工程領域，尤其涉及一種水黃皮耐逆相關基因MpSRG及其編碼的蛋白質與應用。

背景技術

鹽堿、干旱等非生物脅迫影響著農作物的生長發育，嚴重時甚至導致作物死亡。為了提高農作物產量，培育耐逆性作物品種是主要的應對方法之一。目前，通過基因工程的方法育種已經成為培育耐逆性作物的重要方法之一。高等植物可以通過多種途徑來應對環境中的這些不利因素。隨著測序技術的發展，尤其是轉錄組測序技術的廣泛應用，人們在植物體內發現了很多功能未知的基因可能參與了植物耐逆調控。這些新的基因功能未知，有些也沒有發現保守結構域，對其所發揮的機理也知之甚少。人們從苜蓿、鷹嘴豆、沙冬青和大豆等不同豆科植物中克隆到了許多功能未知的基因，然而還未從水黃皮中克隆到與非生物逆境相關的基因。

水黃皮為典型的半紅樹植物，既能生長于海岸或沿河的灘涂地區，又可在遠離海邊的陸地上生長，對土壤鹽度表現出廣泛的適應性，因而是研究植物耐逆性的良好材料。同時，作為豆科植物，水黃皮的基因資源將可通過轉基因技術應用于大豆或其它農作物的品種改良。

發明內容

本發明的目的在于提供一種水黃皮耐逆相關基因MpSRG，其堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示。在本發明中，所述水黃皮耐逆相關基因MpSRG的具體堿基序列長度為402bp，如SEQ?ID?NO：1所示：

在本發明中，將SEQ?ID?NO：1所示的基因序列命名為MpSRG。

本發明的第二個目的在于提供一種水黃皮耐逆相關基因MpSRG編碼的蛋白質，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。在本發明中，水黃皮耐逆相關基因MpSRG編碼的蛋白質的具體長度為133aa，如SEQ?ID?NO：2所示：

本發明的第三個目的在于提供一種含有所述水黃皮耐逆相關基因MpSRG的重組載體。

所述重組載體為重組植物表達載體。所述重組載體可以通過將上述水黃皮耐逆相關基因MpSRG插入到克隆載體或表達載體而得到。

適于構建本發明所述重組載體的克隆載體包括但不限于，例如pMD18-T、pMD19-T、pMD20-T、pMD19-T?Simple?Vecter、pUC18、pUC19、pUC118、pUC119等。

適于構建本發明所述的表達載體包括但不限于，例如：pBI121、p13W4、pGEM等。

重組植物表達載體包括但不限于雙元農桿菌表達載體、可用于植物微彈轟擊的載體等。所述植物表達載體還可包含外源基因的3’端非翻譯區域，即包含聚腺苷酸信號和任何其它參與mRNA加工或基因表達的DNA片段。所述聚腺苷酸信號可引導聚腺苷酸加入到mRNA前體的3’端，如農桿菌冠癭瘤誘導(Ti)質粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因（如大豆貯存蛋白基因）3’端轉錄的非翻譯區均具有類似功能。

使用MpSRG構建重組植物表達載體時，在其轉錄起始核苷酸前可加上任何一種組成型啟動子，如花椰菜花葉病毒（CAMV）35S啟動子、玉米的泛素啟動子（Ubiquitin），它們可單獨使用或與其它植物啟動子結合使用；此外，使用本發明的基因構建植物表達載體時，還可使用增強子，包括翻譯增強子或轉錄增強子，這些增強子區域可以是ATG起始密碼子或鄰接區域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區域可以來自轉錄起始區域或結構基因。

為了便于對轉基因植物細胞或植物進行鑒定及篩選，可對所用植物表達載體進行加工，如加入可在植物中表達的編碼可產生顏色變化的酶或發光化合物的基因（GUS基因、螢光素酶基因等）、具有抗性的抗生素標記物（慶大霉素標記物、卡那霉素標記物等）或是抗化學試劑標記基因（如抗除莠劑基因）等。從轉基因植物的安全性考慮，可不加任何選擇性標記基因，直接以逆境篩選轉化植株。

本發明的第四個目的在于提供含有本發明所述重組載體的重組細胞。所述重組細胞可以通過將含有水黃皮耐逆相關基因MpSRG的重組載體轉化至宿主細胞而得到。

適于構建本發明所述重組細胞的宿主細胞包括但不限于，例如：根癌農桿菌細胞LBA4404、EHA105、GV3101等。

在本發明的一個實施方案中，所述重組細胞為根癌農桿菌細胞LBA4404-MpSRG。