[發明專利]熱休克蛋白47膠質瘤相關腫瘤抗原及應用

有效

• 申請號: 201310362324.5
• 申請日: 2013-08-17
• 公開（公告）號: CN104374918B
• 公開（公告）日: 2016-11-09
• 發明（設計）人: 吳哲褒;徐建青;周良輔;仇超;蔡霖;林紹堅
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬于生物制藥領域，涉及熱休克蛋白47膠質瘤相關腫瘤抗原，更具體地，涉及熱休克蛋白47作為與預后相關的惡性膠質瘤特異性腫瘤抗原以及所述抗原的兩個CTL表位及其九肽氨基酸序列，及其所述CTL表位誘導T細胞反應用以臨床預后判定，及其在制備惡性膠質瘤免疫治療疫苗中的用途。?

背景技術

現有技術公開了膠質瘤（glioma）是中樞神經系統最常見的腫瘤，其中惡性膠質瘤(WHO?III、IV級)治愈率低，復發率高，預后極差，尤其是對于IV級的膠質母細胞瘤（glioblastoma,GBM）患者。臨床實踐顯示，由于大多數膠質瘤呈浸潤性生長，與正常組織無明顯分界，所以單靠手術無法根治。目前，對于GBM推薦標準治療方案，即手術后同步放化療加6個療程的替莫唑胺(TMZ)化療，其平均生存期僅為12-15個月。因此，對于惡性膠質瘤，尋找更有效的治療方法是目前臨床急需解決的難題。目前免疫治療，尤其是利用自身T細胞殺傷顯微手術后殘留的腫瘤細胞，得到了業內極大的關注。?

熱休克蛋白（heat?shock?protein,HSP）是進化上高度保守的蛋白，其功能涉及細胞生物學的各個方面。HSP目前分成如下六類：Hsp100,Hsp90,Hsp70,Hsp60,Hsp40和小分子HSP。就免疫的角度而言，HSP本身可以作為抗原，或者作為抗原呈遞的輔佐分子。研究顯示，HSP可以綁定抗原肽從而呈遞給抗原呈遞細胞（antigen?presentation?cell，APC）。癌癥細胞上的HSP肽復合物能夠激發自身的適應性和固有免疫系統。國際專利公布號WO2009/117116EN---熱休克蛋白GP96的疫苗接種及其使用方法中，公開了被基因修飾以表達編碼分泌形式的熱休克蛋白(hsp)gp96多肽的核酸的腫瘤細胞。該HSP-96肽疫苗已經安全地用于GBM患者的臨床治療（Crane?CA,etal.Clin?Cancer?Res,2013;19:205-214.）。?

HSP47，亦稱SERPINH1或者colligin2，作為膠原特定的分子伴侶，其參與各種膠原前蛋白成熟的各個過程。對于膠質瘤而言，目前有關HSP47的文獻報道中，涉及HSP47在膠質瘤血管上的表達（Mustafa?D,et?al.Brain?Pathol,2010;20:50-65.）；HSP47參與了膠質瘤新生血管的發生發展（Mustafa?DA,et?al.Molecular&cellular?proteomics:MCP,2007;6:1147-1157.）。迄今，尚未見HSP47作為惡性膠質瘤相關抗原或者其他腫瘤的相關抗?原的報道。?

表位是抗原分子中可與CTL、Th和B細胞表面受體結合，誘導特異性細胞免疫和體液免疫，進而產生免疫保護作用的一段氨基酸序列。有研究提出，通過篩選富含多個CTL、Th和B細胞優勢表位的氨基酸序列為抗原，可達到既能誘導免疫應答又可減少免疫病理反應的目的；能夠有效增強表位提呈的效率，解決表位疫苗的免疫原性弱目的。膠質瘤相關抗原的T細胞表位能誘導T細胞反應從而殺傷腫瘤細胞，在已報道的膠質瘤相關抗原中，涉及T細胞表位的有下列基因：SART-1，SART-3,IL-13receptora2chain,ARF4L,GALT3,AIM-2,EphA2,EGFRvIII,HER-2,gp100,MAGE-1,gBK,TRP-2,Sox2,Sox11,Sox6,HSD3B7等。其相應的T細胞表位如表1所示。?

表1膠質瘤相關抗原的表位肽?

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研究顯示，上述膠質瘤相關抗原的表位肽尚存在如下幾個問題：①部分抗原在正常腦組織?存在高表達，如ARF4L、GALT3等；②上述抗原肽誘導的CTL反應是否與預后有關尚不清楚。?

針對現有技術中存在的不足，本申請的發明人擬提供一種全新的與預后相關的惡性膠質瘤特異性腫瘤抗原及其兩條保護性的9肽CTL表位，及其誘導的T細胞免疫應答用以臨床預后判定。?

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的不足，提供一種全新的熱休克蛋白47膠質瘤相關腫瘤抗原，具體涉及熱休克蛋白47作為與預后相關的惡性膠質瘤特異性腫瘤抗原以及所述抗原的兩個保護性CTL表位及其九肽氨基酸序列，及其所述CTL表位誘導T細胞免疫應答用以臨床預后判定，及其在制備惡性膠質瘤免疫治療疫苗中的用途。?