[發明專利]一種用于誘導系統性硬化癥模型的裝置

有效

• 申請號: 201310361919.9
• 申請日: 2013-08-16
• 公開（公告）號: CN104367990B
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發明（設計）人: 梁敏銳;鄒和建;何睿;呂嬌艷
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: A61K38/14
• 分類號: A61K38/14;A61K31/739
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙)31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬醫學研究用生物器材領域，涉及微滲透壓泵裝置。具體涉及一種用于誘導系統性硬化癥模型的微滲透壓泵裝置。

背景技術：

硬皮病(scleroderma)是一種以皮膚及各系統組織纖維化為特征的結締組織疾病。一旦內臟受累又稱為系統性硬化癥(systemic sclerosis，SSc)，此類患者病情趨于惡化，5年生存率為34～80％。

系統性硬化癥發病機制錯綜復雜，目前研究結果認為，在遺傳易感性基礎上，由于環境因素刺激而激活機體的炎癥反應和自身免疫應答，進而血管內皮細胞受損，成纖維細胞活化、增殖，大量合成細胞外基質，造成組織纖維化，隨著病情發展，炎癥消退，纖維化反應仍不可逆轉，最終導致多系統血管病變、組織纖維化和內臟功能衰竭，病情難以逆轉，且至今尚無有效治療手段，因此，對系統性硬化癥的發病機制和治療靶點深入探討已引起本領域研究人員的關注。

研究實踐顯示，建立穩定的體內、外研究模型，對于闡明發病機制和遴選治療藥物具有非常重要的意義。實踐顯示，目前已知的模型均存在一定的局限性：1999年Yamamoto等人采用博來霉素皮下注射制備了皮膚硬化動物模型，此模型以局限性皮膚纖維化為主，內臟受累發生率低，且需要每日注射，工作量大，還易導致小鼠皮膚的局限性潰爛；緊皮鼠(Tskl^/+小鼠)是原纖維蛋白1(fibrill in1，FBN1)基因編碼變異所致，可自發產生硬皮病樣改變，以彌漫性皮膚肥厚為特征，與人類硬皮病不同，緊皮鼠皮下組織異常增生，而真皮層未受明顯影響，易發展成肺氣腫樣改變而非纖維化反應，基本不出現血管病變，炎癥改變亦不明顯；移植物抗宿主反應模型亦可表現為皮膚纖維化，皮膚脂肪層消失以及單核細胞浸潤，但相關品系小鼠獲得成本高，培養環境要求較嚴格，不宜推廣。目前已知，Alzet Osmotic Pumps是體積只有膠囊大小的滲透壓泵，適合植入實驗動物體內，針對特定部位給藥，或將藥劑用導管導入作用部位，在生命科學實驗研究中，Alzet pumps已成功的運送上百種藥劑，包括蛋白質，多肽，生長因子，基因研究及治療中的Antisense和最新的干擾RNA(RNAi)，抗生素，化療藥，激素，類固醇及其它短效期的化合物。通過ALZET Osmotic pumps持續給藥可以建立多種疾病的動物模型，如高血壓及Parkinson帕金森病的動物模型，其在動物細胞給藥、動物模型建構、藥物及分子篩選、藥理藥代藥效等眾多領域發揮了不可替代的作用。Alzet微滲透壓泵作為一種利用微滲透壓原理制備的組織相容性的藥物緩釋系統，1987年Harrison JH等人采用微滲透壓泵裝載博來霉素(100mg/kg)皮下植入C57BL/6小鼠4～8周誘導肺纖維化的動物模型。但目前尚無采用Alzet微滲透壓泵制備硬皮病研究模型的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于誘導系統性硬化癥模型的裝置，尤其涉及一種用于誘導出穩定的系統性硬皮病模型的微滲透壓泵裝置。本發明所述的微滲透壓泵裝置具有穩定性、重復性、可操作性和標準化的特點。

本發明經過反復實驗，摸索相關實驗條件，采用Alzet微滲透壓泵(可市購)局部予以脂多糖急性刺激，輔以博來霉素緩釋，能模擬系統性硬化癥的發生，尤其適用于系統性硬皮病發病機制和治療靶點的研究及深入探討。

具體的，本發明的一種用于誘導系統性硬化癥模型的裝置，其包括Alzet微滲透壓泵(可市購)，脂多糖和博來霉素，所述的博來霉素(Sigma)溶液裝載于Alzet(Model2004)微滲透壓泵中，所述的脂多糖(LPS)溶液包被于所述的泵表面。

本發明中，Alzet微滲透壓泵(可市購)為Alzet(Model2004)；

本發明中，博來霉素(Bleomycin，BLM，Sigma)工作液濃度為12mg/ml，博來霉素以0.25ul/h的速度持續釋放于外界環境；

本發明中，脂多糖(LPS)生理鹽水溶液濃度為100ng/ml；

本發明的用于誘導系統性硬化癥模型的裝置，其特征在于，通過下述方法制得：

在無菌超凈臺中將博來霉素(Sigma)溶液裝載于Alzet(Model2004)微滲透壓泵中，蓋緊旋帽后浸于脂多糖(LPS)溶液，在37℃溫箱中放置40小時備用；

其中，博來霉素(Bleomycin，BLM，Sigma)工作液濃度為12mg/ml，博來霉素以0.25ul/h的速度持續釋放于外界環境；

脂多糖(LPS)生理鹽水溶液濃度為100ng/ml。