[發明專利]一種快速檢測鹽酸克倫特羅試劑盒的研發與應用

無效

• 申請號: 201310360312.9
• 申請日: 2013-08-19
• 公開（公告）號: CN103439494A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 陳潔
• 申請（專利權）人: 常州泰晶生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/545
• 分類號: G01N33/545
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明屬于食品質量安全檢測領域，特別涉及一種對鹽酸克倫特羅特異性快速檢測試劑盒的研發與應用。主要應用于飼料、尿液、畜產品等樣本中殘留鹽酸克倫特羅的快速檢測。

背景技術：

鹽酸克倫特羅(Clenbuterol)又名雙氯醇胺，氨哮素，克喘素，是一種人工合成的B2-腎上腺素受體激動劑，用于防治支氣管哮喘、哮喘性慢性支氣管炎及肺氣腫等呼吸系統疾病。在獸醫臨床上，當其應用劑量達到治療量的5～10倍、且應用時間較長時，能降低動物胴體脂肪沉積、增加肌肉的合成。因此又有“瘦肉精”之稱。鹽酸克倫特羅在動物體內吸收快、分布廣、半衰期長、易積累，人在食用了殘留有鹽酸克倫特羅的肉品后可能引起心悸、震顫、頭暈、頭痛等癥狀甚至導致死亡。因此，必須加強飼料、尿液、畜產品等樣本中殘留鹽酸克倫特羅有效的監測和快速的檢測。

目前，檢測鹽酸克倫特羅殘留的方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜一質譜聯用法、毛細管電泳法和酶聯免疫吸附分析法。采用儀器分析法需要昂貴的儀器設備、專業化的實驗室和訓練有素的專門人才，對樣品前處理的要求高、過程復雜、速度慢、選擇性差，難以適應大量樣本和現場快速檢測的要求。本發明的快速檢測鹽酸克倫特羅試劑盒具有靈敏度高、分析成本低、簡便快捷、儀器設備簡單等優點，適合于大批量樣品的快速檢測。但現有的鹽酸克倫特羅免疫吸附檢測試劑盒的研制，由于人工抗原的合成是先將鹽酸克倫特羅苯環上的氨基重氮化，然后在弱堿性條件下與蛋白質上的酪氨酸共價偶聯，這樣就造成了鹽酸克倫特羅的特異性部分被蛋白質大分子掩蓋，所獲抗體與鹽酸克倫特羅結構類似物有比較嚴重的交叉反應，在實際檢測過程中經常出現假陽性，同時有一些陽性樣品不能被確認。

發明內容：

本發明的目的是提供一種對鹽酸克倫特羅具有高選擇性、高靈敏度，適合飼料、尿液、畜產品等樣本中殘留鹽酸克倫特羅快速檢測的競爭性膠體金免疫吸附分析技術。

本發明的又一個目的是提供一種特異性強、靈敏度高、方便快捷、廉價高效，適合飼料、尿液、畜產品等樣本中殘留鹽酸克倫特羅現場快速檢測的競爭性膠體金免疫吸附檢測試劑盒。

本發明的技術方案一：對鹽酸克倫特羅具有特異性的膠體金免疫吸附分析技術及其檢測試劑盒，其特征是以鹽酸克倫特羅與鹵代羧酸酯為起始原料。

所述半抗原是以鹽酸克倫特羅與鹵代羧酸酯為起始原料反應生成的衍生物。

所述人工抗原是采用活性酯法或混合酸酐法將所述半抗原與蛋白質共價偶聯而成。

以所述抗體或包被原包被聚苯乙烯微孔板，以0.5％明膠封閉微孔表面未被吸附的位點。

本發明的技術方案二：對鹽酸克倫特羅具特異性的膠體金免疫吸附分析檢測試劑盒，其特征是由盒體及置于盒體內的可拆卸式聚苯乙烯微孔板、對鹽酸克倫特羅具特異性親合力的抗體或包被原、緩沖液、封閉液(也可事先將所述抗體或包被原包被在微孔板上并封閉后置盒體內)、鹽酸克倫特羅標樣、標記物、底物液、顯色劑、終止液和使用說明書組成。

運用上述對鹽酸克倫特羅其特異性的競爭性膠體金免疫吸附分析技術，在盒內設置相關試劑與材料，制備免疫檢測試劑盒，用于飼料、尿液、畜產品樣本中殘留鹽酸克倫特羅的快速檢測。試劑盒檢測鹽酸克倫特羅的線性濃度范圍是10≈’1Oo?Vg/mL，檢鋇4限＜0.Ing/mL。

本發明的科學性強、技術先進，成本低，應用方法簡便。基本依據是小分子化合物免疫分析化學原理和技術。分子量小于5000道爾頓的化合物一般不具備免疫原性，將突出鹽酸克倫特羅分子結構特征的半抗原與蛋白質共價偶聯制備人工抗原和包被原，以人工抗原免疫動物產生對鹽酸克倫特羅具特異性親合力的抗體。小分子化合物雖然不具備免疫原性但具有反應原性，能與相應抗體在離體條件下發生免疫結合并符合質量作用定律。運用該技術，在盒體內設置相關試劑與材料，制備免疫檢測試劑盒，用于飼料、尿液、畜產品等樣本中殘留鹽酸克倫特羅的現場快速檢測。通過參看說明書，一般工作人員也可以進行現場檢測分析，便于推廣使用和運用。

具體實施方式：

一、對克倫特羅具特異性的競爭性膠體金免疫吸附分析技術實施例

1、將鹽酸克倫特羅與Y一溴代丁酸酯反應生成衍生物共價偶聯合成人工抗原和包被原。

2、用所述抗體包被聚苯乙烯微孔板，以0.59′o明膠封閉微孔表面未吸附抗體的位點。