[發明專利]一種高純度金腰素的制備方法

無效

• 申請號: 201310360127.X
• 申請日: 2013-08-19
• 公開（公告）號: CN103408526A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 張金芳;萬冬梅
• 申請（專利權）人: 南京標科生物科技有限公司
• 主分類號: C07D311/30
• 分類號: C07D311/30;C07D311/40
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種高純度金腰素的制備方法。

背景技術

母菊是菊科植物，味辛，微苦，性涼，常用于感冒發熱、咽喉腫痛、肺熱咳喘、勢痹腫痛、瘡腫等?。現代研究發現母菊中含有大量揮發油、黃酮類和內酯類物質，具有消炎、解痙、抑菌作用。金腰素為母菊中黃酮類物質，分子式C19H18O8?，分子量375.35，具有抗菌、抗病毒作用，尤其具有低細胞毒性，而具有很強的抗EV71活性。

通過文獻檢索，現有高純度金腰素的制備方法，多采用硅膠柱分離，方法專屬性差，方法操作復雜，收率低，不適合工業化。

發明內容

本發明的目的是解決現有技術不足和缺陷，提供一種操作簡便的高純度金腰素的制備方法。

本發明的目的是這樣來實現的：一種高純度金腰素的制備方法，其特征在于以下步驟：

????1）取母菊粉碎，加入適量水和生物酶，30-40℃酶解10-40h，再加入5-10倍量50-90%乙醇溶液回流提取，提取液濃縮至無醇，加入大孔樹脂柱吸附，乙醇溶液梯度洗脫，洗脫液濃縮調節ph1-3放置結晶，結晶物濾出；

????2）上述結晶物用乙醇溶液解加入聚酰胺樹脂干燥，裝柱，乙醇溶液梯度洗脫，洗脫液濃縮結晶，結晶物再用99%乙醇溶液重結晶即得。

????步驟1）中所述生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶的中的一種，用量為原料量的1-5‰。

????步驟1）中所述的大孔樹脂型號可選HZ816、ADS-21、AB-8和HPD400中的一種。

步驟1）、2）中所述的乙醇溶液梯度洗脫為：先用3-5倍柱體積20-50%乙醇溶液洗脫，再用5-10倍量60-90%乙醇溶液洗脫。

采用本發明制備金腰素，水解過程溫和，產品收率高，方法操作簡單，污染小，能耗低，易于工業化生產。

具體實施方式：

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

實施例1：

取10kg母菊粉碎，加入等體積ph4的鹽酸水溶液和30g纖維素酶，在溫度40℃條件下酶解20h，然后加入10倍量70%乙醇溶液回流提取2次，提取液減壓濃縮，濃縮液加入HZ816大孔樹脂吸附，先用5倍柱體積30%乙醇溶液洗脫，再7倍量70%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮調節ph2放置結晶，結晶物濾出用90%乙醇回流溶解，加入100g聚酰胺樹脂，干燥，裝柱，先用4倍柱體積40%乙醇溶液洗脫，再6倍量75%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮結晶，結晶物再用99%乙醇溶液回流溶解結晶，結晶物干燥，得金腰素3.2g，經HPLC檢測，含量98.3%。

實施例2：

取10kg母菊粉碎，加入等體積p4.5的硫酸水溶液和40g淀粉酶，在溫度50℃條件下酶解18h，然后加入6倍量80%乙醇溶液回流提取3次，提取液減壓濃縮，濃縮液加入ADS-21大孔樹脂吸附，先用5倍柱體積40%乙醇溶液洗脫，再10倍量75%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮調節ph3放置結晶，結晶物濾出用95%乙醇回流溶解，加入150g聚酰胺樹脂，干燥，裝柱，先用5倍柱體積35%乙醇溶液洗脫，再7倍量70%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮結晶，結晶物再用99%乙醇溶液回流溶解結晶，結晶物干燥，得金腰素3.6g，經HPLC檢測，含量98.5%。

實施例3：

取10kg母菊粉碎，加入等體積ph5的鹽酸水溶液和50g果膠酶，在溫度45℃條件下酶解25h，然后加入10倍量50%乙醇溶液回流提取2次，提取液減壓濃縮，濃縮液加入AB-8大孔樹脂吸附，先用5倍柱體積20%乙醇溶液洗脫，再7倍量60%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮調節ph1放置結晶，結晶物濾出用95%乙醇回流溶解，加入130g聚酰胺樹脂，干燥，裝柱，先用5倍柱體積20%乙醇溶液洗脫，再8倍量60%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮結晶，結晶物再用99%乙醇溶液回流溶解結晶，結晶物干燥，得金腰素3.6g，經HPLC檢測，含量96.9%。

實施例4：

取10kg母菊粉碎，加入等體積ph3的鹽酸水溶液和40g纖維素酶，在溫度45℃條件下酶解15h，然后加入8倍量90%乙醇溶液回流提取2次，提取液減壓濃縮，濃縮液加入HPD400大孔樹脂吸附，先用4倍柱體積40%乙醇溶液洗脫，再5倍量90%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮調節ph3放置結晶，結晶物濾出用95%乙醇回流溶解，加入150g聚酰胺樹脂，干燥，裝柱，先用3倍柱體積50%乙醇溶液洗脫，再5倍量90%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮結晶，結晶物再用99%乙醇溶液回流溶解結晶，結晶物干燥，得金腰素3.5g，經HPLC檢測，含量97.4%。