[發(fā)明專利]一株黃綠木霉菌及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310358858.0
• 申請(qǐng)日: 2013-08-08
• 公開（公告）號(hào): CN103484379A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙蕾;竺曉平;張亞慶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 趙蕾
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;A01N63/04;A01P21/00;C12R1/885
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株黃綠木霉菌及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

木霉屬(Trichoderma?spp.)真菌，屬雙核菌門、半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、從梗孢科，是一類分布廣泛的生防益菌。根據(jù)Bisset系統(tǒng)，木霉可以分為31個(gè)種，最常見的木霉種類有哈茨木霉(Trichoderma?harzianum)、康寧木霉(Trichoderma?koningii)、綠色木霉(Trichoderma?viride)、長(zhǎng)枝木霉(Trichoderma?longibrachiatum)等。木霉菌在自然界分布廣泛，是土壤微生物的重要組成部分，富含有機(jī)質(zhì)的土壤、腐爛的木材、植物根際等均是其良好的棲息場(chǎng)所。近年來人們發(fā)現(xiàn)，木霉不僅對(duì)植物病原菌具有拮抗效應(yīng)，還可在植物根部定殖并成為植物共生體，促進(jìn)植物根系發(fā)育及植株生長(zhǎng)，提高植物抗非生物脅迫的能力。磷是植物必需三大營(yíng)養(yǎng)元素之一，能夠促進(jìn)植物根系發(fā)育，提高光合作用速率，增強(qiáng)植物的耐鹽性，但土壤中缺乏有效磷。

磷是植物生長(zhǎng)發(fā)育的必需元素之一，是植物體內(nèi)核酸及多種酶輔酶、ATP等的重要組成成分，并參與光合作用，呼吸作用等多種生理代謝途徑。磷還可以提高植物的抗性，促進(jìn)植物在逆境中的生長(zhǎng)發(fā)育。有研究稱在鹽脅迫條件下施加磷能緩解鹽脅迫對(duì)萵苣的傷害，促進(jìn)植物對(duì)礦質(zhì)元素和水分的吸收。但土壤中可供植物直接利用的有效磷含量很少，土壤中的磷多以不溶性的磷酸鹽的形式存在。利用前文分離的具有很高的溶磷能力的黃綠木霉L進(jìn)行盆栽實(shí)驗(yàn)，全面測(cè)定鹽脅迫下黃綠木霉L對(duì)黃瓜表型、生理生化以及光合作用的影響，確定了黃綠木霉L的解鹽促生能力。雖然有研究表明木霉具有解鹽促生作用，但是關(guān)于木霉解鹽促生的機(jī)制研究還很少。因此，若能深入了解木霉菌可能的解鹽促生機(jī)制，并以此有目標(biāo)地篩選多功能木霉菌，將有利于當(dāng)今綠色農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展，具有重要的理論及實(shí)踐意義。由于篩選的黃綠木霉L有很高的溶磷能力以及解鹽促生作用，所以通過水培實(shí)驗(yàn)表明了黃綠木霉L的溶磷作用在解鹽促生中的作用。由于溶磷微生物種類繁多，而且不同菌株的溶磷機(jī)制也不相同，因此利用高效液相測(cè)定黃綠木霉發(fā)酵液有機(jī)酸的種類以初步探究木霉菌溶解難溶性無機(jī)磷的機(jī)制，這對(duì)進(jìn)一步確定溶磷作用在黃綠木霉L解鹽促生中的作用具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

一株產(chǎn)生IAA和嗜鐵素且具有高溶磷特性的黃綠木霉菌(Trichoderma?aureoviride)，其特征在于在緩解鹽脅迫對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)的影響。

菌株能夠緩解鹽脅迫對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)的影響，提高鹽脅迫下黃瓜幼苗葉綠素、可溶性糖以及可溶性蛋白的含量、降低MDA的含量。

利用所述的黃綠木霉菌對(duì)鹽脅迫下黃瓜的促生作用，其特征在于，包括以下步驟：對(duì)基質(zhì)土滅菌后進(jìn)行育苗，待種子萌發(fā)并長(zhǎng)出兩片子葉后，選取生長(zhǎng)狀態(tài)一致的黃瓜幼苗按下表進(jìn)行盆栽試驗(yàn)，20天后稱取新鮮黃瓜葉片0.5g，測(cè)定葉片磷含量、葉綠素、MDA、可溶性糖及可溶性蛋白含量。在有無鹽脅迫下接種黃綠木霉L的黃瓜株高、葉片的葉綠素、MDA、可溶性糖、可溶性蛋白含量均比對(duì)照顯著提高，葉片磷含量比未接菌的對(duì)照組分別提高了23％和35.7％。

水培實(shí)驗(yàn)表明，菌株的溶磷能力是其解鹽促生機(jī)制之一。測(cè)定了黃綠木霉(Trichoderma?aureoviride)L對(duì)土壤中常見的三種不溶性無機(jī)磷，即磷酸氫鈣、磷酸鈣以及磷酸鐵的轉(zhuǎn)化能力，結(jié)果表明，黃綠木霉(Trichoderma?aureoviride)L能夠溶解磷酸氫鈣以及磷酸鈣，但不能溶解磷酸鐵，200mmol/L鹽脅迫對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響及磷酸氫鈣溶解能力的降低大體相當(dāng)。鑒于黃綠木霉(Trichoderma?aureoviride)L發(fā)酵液對(duì)磷酸氫鈣有較強(qiáng)的溶解能力，采用含60mmol?l^-1NaCl的無菌水對(duì)黃瓜幼苗進(jìn)行鹽脅迫，研究黃綠木霉L的溶磷特性對(duì)鹽脅迫下植株生長(zhǎng)的影響。具體步驟如下：基質(zhì)土滅菌后進(jìn)行育苗，待種子萌發(fā)并長(zhǎng)出兩片子葉后，選取生長(zhǎng)狀態(tài)一致的黃瓜幼苗按下表進(jìn)行水培試驗(yàn)，設(shè)置添加木霉發(fā)酵液和磷酸氫鈣(CF+P)、只添加磷酸氫鈣(Non-CF+P)、只添加木霉菌發(fā)酵液(CF-P)以及只添加無菌水(Non-CF-P)四個(gè)處理。每個(gè)處理水培液總體積為80mL，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)4株苗，室溫培養(yǎng)，期間定期添加無菌水以保證水培液總體積恒定，黃瓜培養(yǎng)7d后收獲、拍照，測(cè)定幼苗植株莖長(zhǎng)、根長(zhǎng)、莖與葉鮮重、根鮮重。