[發明專利]一種劍水蚤類浮游動物體內細菌的檢測方法

有效

• 申請號: 201310358527.7
• 申請日: 2013-08-15
• 公開（公告）號: CN103451262A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 林濤;陳衛;蔡博;吳壽可
• 申請（專利權）人: 河海大學
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌;曹翠珍

技術領域

本發明涉及一種在飲用水處理工藝中針對劍水蚤類浮游動物體內細菌的檢測方法。

技術背景

近年來，我國不斷出現劍水蚤類浮游動物穿透飲用水處理工藝系統進入管網的事件，使飲用水安全受到威脅與挑戰。水廠的實踐證明，水處理工藝不能徹底去除水中劍水蚤，劍水蚤成體肉眼可見，其在水處理工藝系統中的出現帶來用戶的感官性狀問題。同時，劍水蚤可作為細菌的載體或其他致病性原生動物的中間宿主，細菌可在劍水蚤的體表和體內穩定賦存；劍水蚤可對其攜帶的細菌提供庇護作用，引起水質生物安全問題。有研究表明，劍水蚤的外殼較為堅硬，對化學消毒劑具有較強的耐性，因此滅活劍水蚤體內攜帶的細菌需要有較長的接觸時間：采用液氯滅活，液氯的接觸時間達到1h時其體內細菌的滅活率僅為0.7log。劍水蚤體內存活的細菌可引起水質的二次污染。因此，有效評價劍水蚤類浮游動物體內細菌的滅活率是保證飲用水水質安全的重要依據。

大量的文獻表明，目前國內外可見文獻報道的無脊椎類浮游動物體內微生物的檢測主要參照Bichai.F提出的方法。該方法采用液氯將劍水蚤體表微生物有效滅活后，通過超聲波細胞破碎儀將浮游動物體表破壞釋放其體內微生物。這個方法主要有兩個弊端：首先，由于采用液氯消毒會造成消毒劑分子滲透入浮游動物體內，對其體內細菌有一定的滅活作用，會造成檢測結果失真；其次，超聲波細胞破碎儀有著大功率、高頻率的特點，能夠破碎組織、細菌、病毒、孢子及其它細胞結構，因而在超聲破碎過程中能夠殺死部分體內細菌，也會造成檢測結果偏低。此外，由于大部分體內細菌都集中在浮游動物的腸道部位，若不將細菌從腸道中釋放，會使浮游動物經超聲破碎后向水中釋放的體內細菌濃度偏低，也會造成檢測結果偏低。

發明內容

為了克服上述現有技術的不足，本發明提供了一種劍水蚤類浮游動物體內細菌的檢測方法，利用紫外輻照進行劍水蚤類浮游動物體表細菌的滅活（可同時滅活取樣中來自水中的自由細菌），采用凍融法結合超聲波清洗儀振蕩來破碎劍水蚤的蚤體，使用解吸劑脫附其體內細菌，最后進行細菌培養和計數進而計算出劍水蚤類浮游動物體內的細菌數量。

本發明是由以下技術手段實現的：

一種劍水蚤類浮游動物體內細菌的檢測方法，包括以下步驟：

（1）從水樣中取成體劍水蚤，放入盛有無菌水的無菌容器中；

（2）對容器的中劍水蚤進行紫外照射，滅活水中自由細菌和劍水蚤體表附著細菌；

（3）滅活結束后將劍水蚤轉移至無菌離心管中，加入無菌水，置于冰箱中恒溫冷凍，冷凍完畢后取出進行恒溫融化，再用超聲波清洗儀進行超聲作用，破碎劍水蚤身體結構；

（4）將離心管中破碎的蚤體和水全部轉移至裝有無菌水的無菌離心管中，加入解吸劑；

（5）對加入解吸劑后的混合液進行離心，洗脫劍水蚤的腸道等器官附著的體內細菌；

（6）取離心后的上清液，進行細菌培養和菌落計數，計算每個劍水蚤體內的細菌數量。

上述試驗方法中各試驗步驟可以優選為如下指標：

所用解吸劑的各成分的質量濃度分別為氯化鈉0.7-1.2%，吐溫800.08-0.12%，磷酸氫二鈉0.2-0.3%，磷酸二氫鉀0.1-0.3%，其余成分為無菌超純水。

對培養皿中劍水蚤進行紫外照射的紫外波長為200-275nm，液面處紫外強度為2500-4000μW/cm²，紫外照射時間20-30min。

置于冰箱中恒溫冷凍溫度為-20至-10℃，冷凍時間為1-2h。

冷凍完畢后取出進行恒溫融化的時間為10-20min，溫度為20-30℃。

冷凍完畢取出進行恒溫融化后再用超聲波清洗儀進行超聲1-5min。

加入解吸劑量為離心管中無菌水體積的5%-20%。

對加入解吸劑后的混合液進行離心的離心機轉速2000-3000rpm、溫度20-25℃、離心時間5-10min。

所述步驟（6）是通過GB/T5750.12-2006對細菌量進行檢測的。

本發明與現有技術相比具有以下優點：

1.體表細菌滅活穩定，對體內細菌影響較小。

本發明采用紫外線照射消毒技術尤其是使用200-275nm的紫外線進行照射，這種波段的紫外線又稱為短波滅菌紫外線。它的穿透能力很弱，無法穿透大部分的透明玻璃及塑料，更不會穿透劍水蚤堅硬的體表外殼。當這種紫外線照射劍水蚤體表時，由于受到劍水蚤體表外殼的保護，紫外線無法穿透體表，保護了其體內細菌免受紫外線照射。