[發(fā)明專利]一種防粘連生物膜及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310358048.5
• 申請日: 2013-08-16
• 公開（公告）號: CN103405811A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳嵐;劉博武
• 申請（專利權(quán)）人: 西安組織工程與再生醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: A61L31/04
• 分類號: A61L31/04;A61L31/00;A61L31/16
• 代理公司: 中國科學(xué)院西安專利中心 61001
• 代理人: 任越

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于組織工程學(xué)醫(yī)用生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防粘連生物膜及其制備方法。

背景技術(shù)

術(shù)后粘連是一種常見的手術(shù)并發(fā)癥，在外科肌腱手術(shù)后通常90%以上的患者均會發(fā)生粘連現(xiàn)象，在腹盆腔手術(shù)后幾乎有70%以上的患者發(fā)生不同程度的粘連并發(fā)癥，粘連可能導(dǎo)致術(shù)后正常生理功能的喪失，引發(fā)腸梗阻、慢性腹痛、慢性盆腔痛及不孕等嚴(yán)重不良癥狀，甚至危及生命。

目前應(yīng)用于防粘連研究的材料有許多，如聚乳酸、透明質(zhì)酸、纖維素、殼聚糖、硅膠、樹脂和肌腱提取的膠原等，期望它們能夠?yàn)榻M織的愈合提供暫時性的物理屏障。上述材料采用高壓靜電紡絲技術(shù)、冷凍干燥技術(shù)或交聯(lián)聚合的方法制備成膜狀或凝膠狀后應(yīng)用，采用聚乳酸、硅膠和樹脂等原料時，通常是在溶液中添加增塑劑、防腐劑和抗氧化劑等進(jìn)行聚合反應(yīng)，這些成分可能對人體帶來潛在的危害；以透明質(zhì)酸、纖維素、殼聚糖和肌腱提取的膠原為原料制備的防粘連生物膜，其防粘連效果尚未達(dá)到臨床認(rèn)可。據(jù)報(bào)道，國內(nèi)外廣泛使用的美國健贊公司（Genzyme?Biosurgery）生產(chǎn)的Seprafilm透明質(zhì)酸膜，用以防止術(shù)后粘連，其結(jié)果顯示有效率僅為47%（Qiqiang?Zeng，et,al.?World?J?Surg?(2007)?31:2125–2131），該產(chǎn)品是由單一的天然多糖高分子材料制備而成，只能起到初步的物理屏障作用，無法達(dá)到抑制炎癥，抑制纖維化，促進(jìn)愈合的效果。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種防粘連生物膜及其制備方法，該生物膜能夠暫時性替代受損組織膜，抑制術(shù)后炎癥及纖維化，防止手術(shù)部位的術(shù)后粘連，具有良好的生物相容性，無排異反應(yīng)，操作使用方便。

本發(fā)明所提出的防粘連生物膜，其特征在于，是以脫細(xì)胞去抗原的豬小腸粘膜下層基質(zhì)（small?intestinal?submucosa，簡稱SIS）為支架材料，復(fù)合透明質(zhì)酸、功能性蛋白和抗炎癥藥物而構(gòu)成的干燥薄膜，干燥薄膜呈淺白色至淡黃色半透明狀，厚度為0.01～0.5mm。

本發(fā)明提出的防粘連生物膜的制備方法，是以SIS為支架材料，采用消毒、脫細(xì)胞去抗原、復(fù)合透明質(zhì)酸、滅菌和改性處理；具體步驟包括：

步驟一、消毒處理：將片狀SIS用純化水清洗至無污物，置于濃度為0.5～5?mol/L的堿溶液中浸泡0.5～2.5小時，然后用純化水清洗至pH中性；所述的堿溶液為氫氧化鈉溶液、或氫氧化鉀溶液、或氫氧化鈣溶液的任一種；

堿溶液具有良好的病毒滅活及殺滅細(xì)菌的能力，保證SIS原料中病毒及細(xì)菌等微生物負(fù)載降低至可接受水平，有利于后續(xù)的操作；同時能夠溶解SIS中水溶性蛋白，保留SIS膠原的三維支架結(jié)構(gòu)。

步驟二、脫細(xì)胞去抗原處理：將消毒處理后的SIS置于濃度為1～5?mg/mL?的胰蛋白酶溶液中浸泡0.5～4小時，再用純化水清洗后，置于含10～25?U/mL濃度DNA水解酶和30～40?U/mL濃度α-半乳糖苷酶的酶液中浸泡0.5～4小時，最后用純化水清洗；

采用胰蛋白酶處理可對SIS中的異種細(xì)胞進(jìn)行消化，并能夠?qū)IS膠原支架結(jié)構(gòu)進(jìn)行適度消化，使其更有利于在體內(nèi)的快速降解；同時，采用酶液處理最大限度地降低了SIS中DNA殘留及α-半乳糖苷的含量，從而保證所得到的SIS具有良好的生物相容性和極低的免疫原性。

步驟三、復(fù)合透明質(zhì)酸：將步驟二處理后的SIS按需要裁剪，置于濃度為5～20?mg/mL的透明質(zhì)酸溶液中浸泡0.5～2小時，取出后真空凍干得到復(fù)合有透明質(zhì)酸的SIS膜片；

在SIS復(fù)合透明質(zhì)酸制備成膜片，可有效提高SIS膜片的吸水能力，在應(yīng)用于臨床手術(shù)時透明質(zhì)酸可迅速貼附至濕潤的手術(shù)部位，避免防粘連生物膜的脫落移位，能長時間有效覆蓋創(chuàng)面，發(fā)揮防粘連生物膜的作用。

步驟四、滅菌處理：將復(fù)合有透明質(zhì)酸的SIS膜片包裝后采用輻照滅菌，輻照劑量為15～40kGy的伽馬射線；

采用伽馬射線輻照滅菌，既保證了SIS膜片產(chǎn)品達(dá)到無菌水平，也能對SIS膜片內(nèi)部結(jié)構(gòu)的支架造成適度破壞，以控制其在體內(nèi)的降解速率，使其在降解前發(fā)揮良好的物理屏障作用，避免因降解過快而無法有效發(fā)揮防粘連作用，或是由于降解過慢而導(dǎo)致多種并發(fā)癥發(fā)生。