[發明專利]單核細胞移動抑制因子的固相合成方法

在審

• 申請號: 201310357339.2
• 申請日: 2013-08-15
• 公開（公告）號: CN103421088A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 張大志;蔡瞻;張恩德;黃景華;王習著;趙明珠;李鵬;臧成旭;姜志輝
• 申請（專利權）人: 廣東八加一醫藥有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 肖愛華

1.單核細胞移動抑制因子的固相合成方法，其特征在于該方法包括如下步驟：

A）在活化劑系統的存在下，由樹脂固相載體和N端Fmoc保護的絲氨酸叔丁酯Fmoc-Ser(tBu)偶聯得到Fmoc-Ser(tBu)-樹脂；

B）通過固相合成法，按照五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser主鏈肽序依次偶聯具有N端Fmoc保護且具側鏈保護的氨基酸，其中天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺為側鏈Trt保護；

C）脫除氨基酸側鏈保護基；

D）裂解，脫除保護基和樹脂得到五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser粗品；

F）純化，凍干，得到五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser精制品。

2.如權利要求1所述的單核細胞移動抑制因子的固相合成方法，其特征在于所述活化劑系統由DCC、HOBT和DMAP組成。

3.如權利要求1所述的單核細胞移動抑制因子的固相合成方法，其特征在于所述樹脂固相載體為2-Cl-Trt樹脂或王樹脂。

4.如權利要求1-3中任一項所述的單核細胞移動抑制因子的固相合成方法，其特征在于所述步驟B）包括如下步驟：

B1)采用DBLK所使述Fmoc-Ser(tBu)-2-Cl-Trt樹脂脫除Fmoc保護基，得到Ser(tBu)-2-Cl-Trt樹脂，所述DBLK由體積比為1:4-5的哌啶和DMF組成；

B2）在偶聯劑系統的存在下，Ser(tBu)-2-Cl-Trt樹脂和Fmoc保護且側鏈Trt保護的天冬酰胺偶聯得到Fmoc-Asn-Ser(tBu)-樹脂；

B3）重復步驟B1、B2，按照五肽Met-Gln-Cys-Asn-Ser主鏈肽序依次進行氨基酸的偶聯。

5.如權利要求4所述的單核細胞移動抑制因子的固相合成方法，其特征在于所述偶聯劑系統包括縮合劑和反應溶劑，所述縮合劑選自DIC/HOBt、DCC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOAt/DIEA；所述反應溶劑選自DMF、DCM、NMP、DMSO中的一種或幾種。

6.如權利要求1-3中任一項所述的單核細胞移動抑制因子的固相合成方法，其特征在于直接購買得到Fmoc-Ser(tBu)-樹脂，從而省略步驟A），所述Fmoc-Ser(tBu)-樹脂為取代值為0.4～1.0mmolNH/g的Fmoc-Ser(tBu)-2-Cl-Trt樹脂或取代值為0.2～0.9mmolNH/g的Fmoc-Ser(tBu)-王樹脂。

7.如權利要求1所述的單核細胞移動抑制因子的固相合成方法，其特征在于：所述步驟F)中，純化為反相色譜純化，色譜柱為反相C₁₈柱，柱溫為30～40℃。