[發明專利]基于GO和GQDs之間ECL-RET作用的傳感器制備方法及激酶檢測應用

有效

• 申請號: 201310356006.8
• 申請日: 2013-08-16
• 公開（公告）號: CN103512878A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 邱建丁;向彩云;梁汝萍
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;C01B31/04
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.基于GO和GQDs之間ECL-RET作用的傳感器制備方法，其特征在于所述制備方法包括以下步驟：

（1）采用Hummers方法制備氧化石墨烯：將1.0?g石墨和1.0?g?NaNO₃加入到46?mL的質量百分濃度為98%的H₂SO₄中，冰浴下緩慢加入6.0?g?KMnO₄，于35?°C水浴中攪拌1?h，加入80?mL超純水，繼續攪拌30?min，再加入200?mL超純水后，逐滴加入6?mL的質量百分濃度為30%的H₂O₂，室溫下反應1?h；將產物趁熱過濾并用超純水清洗至濾液為中性，將產物分散到500?mL超純水中，超聲處理2?h，即制得均勻分散的氧化石墨烯；

（2）利用水熱法制備石墨烯量子點：將干燥的氧化石墨烯置于管式爐中，在N₂保護的條件下，以5?°C/min的升溫速率加熱到200?°C并保持2?h，得到石墨烯片；將0.05?g石墨烯片加入到體積比為1:3的濃硫酸:濃硝酸的混合溶液中超聲17?h，加入250?mL超純水稀釋；用0.22?μm微孔濾膜過濾，將收集的濾餅懸浮在40?mL超純水中，用NaOH調節溶液pH為8后，轉移入反應釜中于200?°C反應12?h，冷卻到室溫；用0.22?μm的微孔濾膜過濾除去大體積的石墨烯片，得到的棕色濾液即為石墨烯量子點溶液；

（3）羧基化石墨烯量子點的制備：將0.05?g的NaOH和0.1?g的氯乙酸鈉加入到20?mL的石墨烯量子點溶液中，超聲反應3?h，用鹽酸調節溶液pH為中性，即得到羧基化的石墨烯量子點；

（4）抗磷酸化絲氨酸抗體氧化石墨烯復合物的制備：將200?μL、1?mg/mL的氧化石墨烯和200?μL、5?μg/mL的抗磷酸化絲氨酸抗體混合，室溫條件下反應12?h；將產物在10000?rpm下離心30?min，用超純水清洗3次，將產物重懸于10?mM、pH?7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，4?oC下保存；

（5）ECL傳感器的制備：玻碳電極先在粒徑為1.0，0.3，0.05?μm的α-Al₂O₃糊中拋光，再用乙醇和水超聲清洗1?min；將10?μL、質量百分濃度為0.5%的殼聚糖溶液滴涂到玻碳電極表面并晾干后，將電極浸入到含有5?mM的N-乙基-N’-1-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽的羧基化石墨烯量子點溶液中，室溫下孵化5?h；用10?mM、pH?7.4的磷酸鹽緩沖溶液清洗后，將電極插入到含有5?mM的N-乙基-N’-1-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、8?mM的N-羥基琥珀酰亞胺和50?μM的多肽溶液中反應3?h；再將電極插入到含有蛋白激酶和三磷酸腺苷的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液中反應2?h，使多肽發生磷酸化；將磷酸化多肽修飾電極在抗磷酸化絲氨酸抗體氧化石墨烯復合物溶液中孵化1?h，即制得ECL傳感器。

2.根據權利要求1所述的基于GO和GQDs之間ECL-RET作用的傳感器制備方法，其特征在于步驟（2）中，所述的濃硫酸的質量百分濃度為98%，濃硝酸的質量百分濃度為68%。

3.根據權利要求1所述的基于GO和GQDs之間ECL-RET作用的傳感器制備方法，其特征在于步驟（5）中，所述的殼聚糖溶液的配制方法為將殼聚糖加入到質量百分比為1%的醋酸溶液中并超聲溶解。

4.根據權利要求1所述的基于GO和GQDs之間ECL-RET作用的傳感器制備方法，其特征在于步驟（5）中，所述的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液的濃度為20?mM，pH為7.4，包含20?mM的MgCl₂。