[發(fā)明專利]一種稻紋枯病菌菌種長期保存的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310351026.6
• 申請日: 2013-08-13
• 公開（公告）號: CN103396948A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張君成;郭地
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/645
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 王素娥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)技術(shù)和生物技術(shù)。具體是一種稻紋枯病菌菌種長期保存的方法。

背景技術(shù)

稻紋枯病是我國水稻生產(chǎn)的首要病害，每年可造成68億多公斤稻糧損失?？茖W(xué)有效地防治稻紋枯病，有賴于該病害的基礎(chǔ)研究，而該病害病原菌菌種的有效保存則是許多基礎(chǔ)研究的基礎(chǔ)工作。在一般實驗室中，稻紋枯病菌菌種的保存往往采用試管斜面培養(yǎng)基生長的菌絲體形態(tài)存放，這樣的保存方法雖然簡單有效，但也存在一些弊病，主要是保存時間較短；要達到長期保存菌種的目的，每年需要1～2次的轉(zhuǎn)管培養(yǎng)護理工作，在菌株數(shù)量較多時，護理工作量大，耗時費力；另外，反復(fù)的轉(zhuǎn)管培養(yǎng)會增加菌種的污染和變異機率。

稻紋枯病菌不產(chǎn)生無性孢子，但很容易形成菌核，該菌核的生存力較強，菌核的這種特性在菌種保存方面很有應(yīng)用價值，但至今未見有將菌核的這種有利特性在菌種保存實踐中的應(yīng)用及其配套技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是利用菌核生存力較強的特性，提供一種稻紋枯病菌菌種長期保存的方法。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：

1.一種稻紋枯病菌菌種長期保存的方法，采用該病菌產(chǎn)生的菌核作為菌種保存形態(tài)。

2.一種稻紋枯病菌菌種長期保存的方法，實施方法的步驟如下：

1）菌核的培養(yǎng)制備：使用PSA培養(yǎng)基培養(yǎng)制備菌核，PSA培養(yǎng)基為：馬鈴薯200g；蔗糖20g；瓊脂20g；水1000ml。按常規(guī)方法制備PSA培養(yǎng)基平板，將待保存的菌株的菌絲體移植入培養(yǎng)基平板上，在溫度為30℃條件下培養(yǎng)，直至平板上產(chǎn)生成熟的菌核。

2）菌核的收集：在無菌條件下，用鑷子挑出步驟1）培養(yǎng)制備獲得的成熟菌核，集中到無菌的培養(yǎng)皿內(nèi)。

3）菌核脫水干燥處理：使用超凈工作臺風(fēng)干法進行菌核的脫水干燥，具體方法是，首先將超凈工作臺的臺面及工作空間進行常規(guī)清潔，把工作吹風(fēng)檔位調(diào)至滿負荷的80%的檔位下預(yù)吹風(fēng)10分鐘，將步驟2）收集盛裝菌核的培養(yǎng)皿敞開，擺置于工作臺面上，一般吹風(fēng)48小時左右菌核即能達到干燥狀態(tài)。

4）菌核的裝管保存：將步驟3）干燥處理后的菌核移裝入無菌的2ml離心管或5ml冷凍管等小管類器具內(nèi)，回蓋密封；置于溫度為4℃條件下存放。

5）菌種復(fù)活培養(yǎng)：將步驟4）保存的菌核取出，無菌條件下移植到PSA培養(yǎng)基上，一般2天后菌核萌發(fā)長出正常的菌絲體。

本發(fā)明的優(yōu)點是：

1.保存時間長，菌種存活期超過4年；

2.實施操作簡易；

3.無需每年轉(zhuǎn)管培養(yǎng)的護理工作；

4.盛裝菌種的管具體積小，存放菌種需要空間少，便于管理。

附圖說明

圖1是本發(fā)明稻紋枯病菌在PSA平板培養(yǎng)基上形成菌核。

圖2是本發(fā)明稻紋枯病菌菌核表面的小液滴。

圖3是本發(fā)明稻紋枯病菌菌核表面產(chǎn)生較多的小液滴。

圖4是本發(fā)明在超凈工作臺上將菌核進行脫水干燥處理的示意圖。

圖5是本發(fā)明裝存菌核的冷凍管示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖與實施例對本發(fā)明作進一步描述。

實施例1

應(yīng)用本發(fā)明一種稻紋枯病菌菌種長期保存的方法，保存稻紋枯病菌菌株2008-20-1，按如下步驟實施操作：

1）菌核的培養(yǎng)制備：使用PSA培養(yǎng)基培養(yǎng)制備菌核，PSA培養(yǎng)基成分為：馬鈴薯200g；蔗糖20g；瓊脂20g；水1000ml；按常規(guī)方法制備PSA培養(yǎng)基平板，將該菌株的菌絲體移植入培養(yǎng)基平板上，在溫度為30℃條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)4天后，在平板上可見形成菌核，7天后可見較多的成熟菌核如圖1所示。

2）菌核的收集：取上步驟培養(yǎng)7天后的培養(yǎng)平板，在無菌條件下，用鑷子挑出成熟的菌核，集中到無菌的培養(yǎng)皿內(nèi)。

3）菌核脫水干燥處理：剛從培養(yǎng)平板上收集的菌核往往含水量較多，甚至有的菌核帶有一些小液滴如圖2、圖3所示。發(fā)明人試驗發(fā)現(xiàn)，含水量較多的新鮮菌核，比干燥的菌核更容易失去活力，因此，在存放之前需要經(jīng)過脫水干燥處理?？稍诔叵虏捎靡话愀稍锓椒ㄟM行干燥處理，但以如下方法更便捷：在工作狀態(tài)的超凈工作臺臺面上風(fēng)干，具體方法是，首先將超凈工作臺的臺面及工作空間進行常規(guī)清潔，把工作吹風(fēng)檔位調(diào)至滿負荷的80%的檔位下預(yù)吹風(fēng)10分鐘，將盛裝菌核的培養(yǎng)皿敞開擺置于工作臺面上如圖4所示，一般吹風(fēng)48小時菌核即能達到干燥狀態(tài)。此方法既能快速干燥，也能保證材料保持無污染狀態(tài)。