[發(fā)明專利]使用RP-HPLC法測(cè)定樺樹皮中樺木醇含量的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310349860.1
• 申請(qǐng)日: 2013-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN103439446A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張梅;彭學(xué)東;趙金召;祁法娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 張家港威勝生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/89
• 分類號(hào): G01N30/89
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• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及樺木醇含量檢測(cè)方法，具體涉及樺樹皮中樺木醇的反相高效液相色譜法(RP-HPLC)含量測(cè)定。

背景技術(shù)

樺木醇(結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附圖1)是一種五環(huán)三萜類化合物，又名白樺酯醇、樺木醇、樺木腦，分子式：C₃₀H₅₀O₂，溶于乙醇、乙醚、氯仿和苯，微溶于冷水、石油醚等有機(jī)溶劑。其植物主要是羅勒、青梅、樺木等的根、莖、葉、樹干和樹皮中，是一種重要的天然生物活性物質(zhì)，具有消炎、抗病毒、抑制頭發(fā)纖維中蛋白質(zhì)溶解、改善受損頭發(fā)光澤、促進(jìn)頭發(fā)生長(zhǎng)等活性，可應(yīng)用于食品、化妝品及醫(yī)藥等行業(yè)。樺木醇也是一種重要的藥物合成中間體，如樺木醇β-樺木醇對(duì)人體黑色素瘤具有良好的抗癌效果，對(duì)前列腺癌、淋巴癌等疾病也有一定的治療效果。在眾多含有樺木醇的植物原料中，具有商業(yè)利用價(jià)值的主要是樺木樹皮。但是近幾年我國(guó)對(duì)樺木樹皮中樺木醇的研究很少。孫宏(高效液相色譜法測(cè)定白樺樹皮中兒茶素和白樺醇的含量，孫宏，張澤，化學(xué)分冊(cè)，2009年第二期)報(bào)道，用色譜柱為C₁₈(150×6.0mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(75+25)混合溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm進(jìn)行含量檢測(cè)。此外王遂(一種白樺樹皮中白樺脂酸、白樺脂醇和齊墩果酸的檢測(cè)方法，王遂，楊傳平，姜靜，劉桂豐，東北林業(yè)大學(xué))利用高效液相色譜條件為C₁₈色譜柱，流動(dòng)相中有機(jī)相為乙腈，水相為體積含量為0.1％的磷酸水溶液，進(jìn)行梯度洗脫。就目前檢測(cè)樺木皮中樺木醇的含量的方法中存在檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度低，操作方法繁瑣，線性關(guān)系差。本發(fā)明提供的方法樣品濃度與峰面積線性關(guān)系好，測(cè)定準(zhǔn)確性高，具有良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，適用于樺樹皮中樺木醇的含量測(cè)定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的操作檢測(cè)缺點(diǎn)，提供一種線性關(guān)系好，測(cè)定準(zhǔn)確性高、具有良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。為達(dá)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

本發(fā)明一個(gè)具體的實(shí)施例中，本發(fā)明采用反相高效液相色譜法測(cè)定樺樹皮中樺木醇的含量。

本發(fā)明又一個(gè)具體的實(shí)施例中，相色譜儀選為美國(guó)Agilent，紫外檢測(cè)器，所選色譜柱為C₁₈(4.6x250mm，5μm)。

本發(fā)明再一個(gè)具體的實(shí)施例中，流動(dòng)相中有機(jī)相為甲醇，水相是體積含量為0.1％的磷酸水溶液，體積比為85-75∶15-25，體積比優(yōu)選80∶20。

本發(fā)明進(jìn)一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的進(jìn)樣量為1-10μl，優(yōu)選5μl。

本發(fā)明還一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述流動(dòng)相流速為0.5-1.5ml/mim，優(yōu)選1.0ml/mim

本發(fā)明最后一個(gè)具體的實(shí)施例中，樺樹皮提取液用甲醇超聲提取，樺木醇采用甲醇溶解，樣品濃度為1.0mg/ml。

附圖說(shuō)明

圖1樺木醇結(jié)構(gòu)式

圖2樺木醇標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

圖3樺樹皮提取液液相色譜圖

圖4樺木醇標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系

圖5樺木醇標(biāo)準(zhǔn)品工作曲線

具體實(shí)施方式

色譜條件：

采用Agilent高效液相色譜儀，用C₁₈色譜柱C₁₈(4.6x250mm，5μm)；

柱溫：25℃；

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm；

流動(dòng)相溶液：甲醇-0.1％磷酸水溶液＝80∶20；

樺木醇標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：精密稱取10.0mg標(biāo)準(zhǔn)品，置于10ml容量瓶中，加甲醇超聲使樣品溶解并定容至刻度線。

樺樹皮提取液配制：準(zhǔn)確稱取樺樹皮粉末1.0g，將樺樹皮粉末放在80℃烘箱中烘干，烘干的樺樹皮粉末中加無(wú)水甲醇至100ml容量瓶中，超聲提取50min，取上清液，用0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，即得到樺樹皮提取液。

樺木醇含量計(jì)算根據(jù)公式：

W＝C×100ml/1.0g×100％

其中，C為待測(cè)樣品的濃度(μg/ml)

W為樺木醇的含量

實(shí)施例1

按上述方法配制的樺木醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)一個(gè)0.2μm有機(jī)系針頭濾器過(guò)濾后，注入1.5ml的樣品瓶中，貼上標(biāo)簽，并放入液相色譜儀中，按本發(fā)明確定的檢測(cè)方法，如下所述的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示峰形良好，樺木醇的色譜峰與其他組分色譜峰完全分離，見(jiàn)圖2所示。