[發明專利]一種合成來考諾肽的方法

在審

• 申請號: 201310345341.8
• 申請日: 2013-08-09
• 公開（公告）號: CN104341496A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 陳新亮;宓鵬程;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京萬慧達知識產權代理有限公司 11111
• 代理人: 楊穎;張金芝

1.一種合成來考諾肽的方法，包括如下步驟：

1）Fmoc-Cys(Trt)-OH與氨基樹脂反應，獲得Fmoc-Cys(Trt)-氨基樹脂；

2）Fmoc-Cys(Trt)-氨基樹脂采用逐一偶聯的方式與Fmoc保護的氨基酸反應，獲得具有側鏈保護的線性來考諾肽-氨基肽樹脂；

3）具有側鏈保護的線性來考諾肽-氨基肽樹脂經裂解反應，獲得來考諾肽線性粗肽；

4）來考諾肽線性粗肽經液相一步氧化法，獲得來考諾肽粗肽；

5）來考諾肽粗肽經純化、轉鹽和凍干后獲得來考諾肽精肽。

2.根據權利要求1所述的方法，其中步驟1）所述的氨基樹脂為Rink?Amide樹脂、Rink?Amide-MBHA樹脂、Rink?Amide-AM樹脂、Rink?Amide-AM樹脂或Siber樹脂。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中步驟1）合成Fmoc-Cys(Trt)-氨基樹脂采用HATU/HOAt作為偶聯試劑，獲得的Fmoc-Cys(Trt)-氨基樹脂的替代度為0.5-0.2mmol/g，優選為0.26mmol/g。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其中步驟2）氨基酸的偶聯采用Fmoc固相多肽合成法，偶聯試劑為DIPCDI+A或者DIPEA+A+B，其中A為HOBt或HOAt，B為PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU或TBTU。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其中步驟2）所用的有機堿為DIPEA或TMP。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其中步驟3）所述的裂解反應所采用的裂解試劑為TFA:PhSMe:PhOMe:EDT:H₂O:TIS=80～90:0～5:0～3:0～5:0～5:0～2（V:V），優選為TFA:PhSMe:PhOMe:EDT:H₂O=85:5:3:5:2。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其中步驟4）所述的液相一步氧化法采用輔助氧化試劑將來考諾肽線性粗肽氧化成含三對二硫鍵的環肽，其中氧化劑為O₂，H₂O₂，I₂，DMSO，DTT，DTT/Cys或GSH/GSSH體系，優選為5～20%DMSO和1～10mmol/L?EDTA，緩沖體系為80～300mmol/L磷酸二氫鈉、8～60mmol/L鹽酸胍和40～100mmol/L的醋酸銨組成的水溶液。

8.根據權利要求7所述的方法，其中緩沖體系為270～285mmol/L磷酸二氫鈉、40～55mmol/L鹽酸胍和80～95mmol/L的醋酸銨組成的水溶液，緩沖體系pH為7.5～9，氧化劑為10～20%DMSO和4～8mmol/L?EDTA。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其中步驟4）所述的液相一步氧化法的環化反應時間為16-24小時，優選為20小時。

10.根據權利要求1或2所述的方法，其中步驟5）所述的純化方法為反相高效液相色譜純化法，其中流動相A相為0.1%TFA/水，B相為乙腈。