[發(fā)明專利]MUC15與p-AKT在制備肝癌預(yù)后評(píng)估試劑盒中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310345222.2
• 申請(qǐng)日: 2013-08-08
• 公開（公告）號(hào): CN104345152A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王紅陽(yáng);陳磊;王若愚
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及MUC15蛋白與p-AKT蛋白的負(fù)相關(guān)性，及其在制備肝癌預(yù)后評(píng)估試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝細(xì)胞癌是最致命的惡性腫瘤之一，世界范圍內(nèi)，占腫瘤相關(guān)死亡的第三位，更是肝硬化病人死亡的首要原因[1，2，3]。2008年，新診斷的肝細(xì)胞癌病人超過70萬(wàn)，按年齡分層，每10萬(wàn)人中，就有新診斷的肝細(xì)胞癌病人16個(gè)[4]。經(jīng)過仔細(xì)篩選的早期腫瘤病人，通過肝切除術(shù)，肝移植和射頻消融，可以得到有效的治療[5]。但晚期腫瘤病人，因?yàn)樾g(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，預(yù)后依然很差[6]。因此，鑒定新的肝癌進(jìn)展分子標(biāo)記，并深刻理解肝癌術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的分子機(jī)制，對(duì)于阻止腫瘤復(fù)發(fā)，延長(zhǎng)患者生存依然十分重要。

蛋白激酶B(Protein?kinase?B，PKB或AKT)是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，與磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)組成的PI3K/AKT信號(hào)通路廣泛存在細(xì)胞中，在凋亡、衰老、增殖等細(xì)胞生命活動(dòng)中起重要作用[7]。非磷酸化AKT蛋白不具備生物學(xué)活性，經(jīng)磷酸化作用生成磷酸化AKT(Phosphorylated?AKT，pAKT)。

粘蛋白屬于一類高分子量糖蛋白家族，通常在胞漿或者細(xì)胞膜上，會(huì)被高度的O型糖基化包被。通常生理?xiàng)l件下，大部分上皮細(xì)胞中具有粘蛋白的表達(dá)。近年來(lái)，很多文獻(xiàn)報(bào)道粘蛋白在炎癥向腫瘤的進(jìn)展過程中，起到了很重要的作用。粘蛋白MUC15最初是從牛奶脂肪小泡的膜上被分離鑒定的，其基因定位于11號(hào)染色體短臂14.3區(qū)[8]。MUC15的mRNA在多種人類組織中通過逆轉(zhuǎn)錄PCR被檢測(cè)到。在人類胎盤的發(fā)育過程中，MUC15的表達(dá)在胚胎晚期比胚胎早期要高。最近有研究揭示，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中，MUC15可能發(fā)揮了潛在的作用。例如，在結(jié)腸腺癌中，MUC15的表達(dá)是異常升高的，并能促進(jìn)人類結(jié)腸癌細(xì)胞的惡性表型[9]。但是過表達(dá)外源的MUC15，能夠抑制滋養(yǎng)層樣細(xì)胞JAR和JEG-3的侵襲能力[10]。

然而，MUC15在肝癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，以及肝癌術(shù)后預(yù)后評(píng)估中的作用等研究，在國(guó)內(nèi)外上仍是空白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供MUC15與p-AKT聯(lián)合應(yīng)用作為肝癌預(yù)后評(píng)估標(biāo)志物的用途。

在本發(fā)明的第一方面，提供MUC15蛋白和p-AKT蛋白的用途，用于制備進(jìn)行肝細(xì)胞癌預(yù)后評(píng)估的診斷試劑。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于肝細(xì)胞癌預(yù)后評(píng)估的試劑盒，所述試劑盒中包括：

特異性檢測(cè)MUC15蛋白表達(dá)水平的試劑；和

特異性檢測(cè)p-AKT蛋白表達(dá)水平的試劑。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的試劑盒中，所述的特異性檢測(cè)MUC15蛋白表達(dá)水平的試劑是抗MUC15蛋白的抗體；和/或所述的特異性檢測(cè)p-AKT蛋白表達(dá)水平的試劑是抗p-AKT蛋白的抗體。

在另一優(yōu)選例中，所述的抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。

在另一優(yōu)選例中，所述的抗MUC15蛋白的抗體是利用MUC15重組蛋白免疫兔子后制備得到的。

在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒中還包括：攜帶有可檢測(cè)信號(hào)分子的檢測(cè)抗體。

在另一優(yōu)選例中，所述的可檢測(cè)信號(hào)分子選自(但不限于)：辣根過氧化物酶、堿性磷酸酯酶、葡萄糖氧化酶、β–D-半乳糖苷酶、脲酶、過氧化氫酶、或葡萄糖淀粉酶。

在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒中還包括：免疫組化試劑。

在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒中，所述的免疫組化試劑包括(但不限于)：顯色試劑，二甲苯，乙醇，H₂O₂甲醇液，抗原修復(fù)液，封閉液，PBS，中性樹脂。

在本發(fā)明的另一方面，提供特異性檢測(cè)MUC15蛋白表達(dá)水平的試劑和特異性檢測(cè)p-AKT蛋白表達(dá)水平的試劑的用途，用于制備肝細(xì)胞癌預(yù)后評(píng)估的試劑盒。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的特異性檢測(cè)MUC15蛋白表達(dá)水平的試劑是抗MUC15蛋白的抗體；和/或所述的特異性檢測(cè)p-AKT蛋白表達(dá)水平的試劑是抗p-AKT蛋白的抗體。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種肝癌預(yù)后評(píng)估的方法，所述方法包括：

(1)應(yīng)用前面任一所述的試劑盒檢測(cè)受試者離體肝癌組織中MUC15蛋白表達(dá)水平和p-AKT蛋白表達(dá)水平；

(2)分析蛋白表達(dá)水平，

若MUC15高表達(dá)且p-Akt低表達(dá)，則該受試者預(yù)后為低死亡率及低復(fù)發(fā)率；

若MUC15低表達(dá)且p-Akt高表達(dá)，則該受試者預(yù)后為高死亡率及高發(fā)率；