[發明專利]耐甲氧西林金黃色葡萄球菌三重實時熒光PCR檢測引物、探針、檢測試劑盒和檢測方法

有效

• 申請號: 201310344659.4
• 申請日: 2013-08-08
• 公開（公告）號: CN103421898A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 袁慕云;許龍巖;張旺;王志強;陽靜;陳碧玲
• 申請（專利權）人: 廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/445
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種耐甲氧西林金黃色葡萄球菌三重實時熒光PCR檢測引物，其特征在于，所述的檢測引物如下所示：

針對nuc基因：5`-GATACACCTGAAACAAAGCATCC-3`；

5`-GACCTTTGTCAAACTCGACTTC-3`；

針對mecA基因：5`-GAAGGTGTGCTTACAAGTGC-3`；

5`-TCAACTAACTATTGATGCTAAAGTTCAA-3`；

針對femA基因：5`-GCCACTATGAGTTAAAGCTTGC-3`；

5`-TCACTGGACCGCGATTTG-3`。

2.一種耐甲氧西林金黃色葡萄球菌三重實時熒光PCR檢測探針，其特征在于，所述的檢測探針如下所示：

nuc基因的探針：5`-AGGTGTAGAGAAATATGGCCCTGAAGC-3`；

mecA基因的探針：5`-TTATGGCTCAGGTACTGCTATCCACCC-3`；

femA基因的探針：5`-ACGAGGTCATTGCAGCTTGCTTACT-3`；

探針的5`端標記有熒光報告基團，3`端標記有熒光淬滅基團，三探針的5`端標記的熒光報告基團是不同的熒光報告基團。

3.根據權利要求2所述的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌三重實時熒光PCR檢測探針，其特征在于，所述的熒光報告基團為TET、HEX或FAM，所述的熒光淬滅基團為BHQ1。

4.一種耐甲氧西林金黃色葡萄球菌三重實時熒光PCR檢測試劑盒，包括實時熒光定量PCR反應液、耐熱DNA聚合酶、檢測引物和檢測探針，其特征在于，

所述的檢測引物包括三對：

針對nuc基因：5`-GATACACCTGAAACAAAGCATCC-3`；

5`-GACCTTTGTCAAACTCGACTTC-3`；

針對mecA基因：5`-GAAGGTGTGCTTACAAGTGC-3`；

5`-TCAACTAACTATTGATGCTAAAGTTCAA-3`；

針對femA基因：5`-GCCACTATGAGTTAAAGCTTGC-3`；

5`-TCACTGGACCGCGATTTG-3`；

所述的檢測探針包括：

nuc基因的探針：5`-AGGTGTAGAGAAATATGGCCCTGAAGC-3`；

mecA基因的探針：5`-TTATGGCTCAGGTACTGCTATCCACCC-3`；

femA基因的探針：5`-ACGAGGTCATTGCAGCTTGCTTACT-3`；

探針的5`端標記有熒光報告基團，3`端標記有熒光淬滅基團，三探針的5`端標記的熒光報告基團是不同的熒光報告基團。

5.一種非疾病的診斷和治療目的的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌三重實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）對樣品進行增菌培養，提取增菌液中菌體的基因組DNA作為模板；

（2）使用權利要求1所述的針對nuc基因、mecA基因和femA基因的檢測引物和權利要求2所述的針對nuc基因、mecA基因和femA基因的檢測探針，與實時熒光PCR擴增用的反應液及耐熱DNA聚合酶混合形成擴增反應體系；

（3）將擴增反應體系在熒光PCR儀上進行實時熒光PCR反應，反應結束后，根據探針標記的熒光報告基團記錄的熒光信號，讀取并記錄各檢測樣品的PCR擴增循環次數（Ct）；

（4）根據各樣品的Ct值，按照建立的判斷標準，判斷樣品中是否含有耐甲氧西林金黃色葡萄球菌。