[發明專利]提升包被核周因子抗原活性的工藝方法

無效

• 申請號: 201310343749.1
• 申請日: 2013-08-08
• 公開（公告）號: CN104345142A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 賈江濤
• 申請（專利權）人: 北京和杰創新生物醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 天津三元專利商標代理有限責任公司 12203
• 代理人: 胡婉明

技術領域

本發明涉及一種提升包被核周因子抗原活性的工藝方法。

背景技術

目前，免疫學檢測技術及其產品已廣泛應用于重大傳染性疾病、自身免疫性疾病、腫瘤標志物、食品安全及優生優育等眾多檢測領域，在這些檢測技術如間接免疫熒光試驗、酶聯免疫吸附試驗、酶聯免疫斑點法試驗以及膠體金快速檢測等試驗中，抗原的包被都是檢測前必不可少的重要環節。目前抗原的包被都是根據抗原自身的特點，如等電點、自身結構、所帶電荷等選擇相應的包被方法，包被的結果是通過物理或化學作用使抗原吸附于包被載體表面，使得后續的免疫反應得以進行。現有包被技術所忽略的問題是抗原吸附于載體表面后所產生的空間結構變化，這種變化會導致位于抗原表面的一部分抗原決定簇埋藏于抗原結構內部，無法與其對應的特異性抗體發生結合，由此而產生的特異性結合的抗體數量就會減少，最終導致檢測靈敏度水平有所下降。因而如何解決抗原表面的抗原決定簇減少這個問題，成為提升抗原反應活性、提高檢測靈敏度水平以及改善產品性能的關鍵。因此，有待研究提升抗原反應活性的方法。

發明內容

本發明的主要目的在于克服現有產品存在的上述缺點，而提供一種提升包被核周因子抗原活性的工藝方法，通過改變抗原的處理方式，使抗原的高級結構得以保存，保留更多的抗原決定簇，能夠結合更多的特異性抗體，從而有效提升抗原的反應活性。

本發明的目的是由以下技術方案實現的。

本發明提升包被核周因子抗原活性的工藝方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)將取自正常人待脫落的頰粘膜細胞進行分離純化，選用涂片方法將頰粘膜細胞包被于載玻片對應的孔徑內；(2)將恒溫干燥箱調至35±5℃，使涂好的細胞載片在干燥箱內恒溫干燥40分鐘至100分鐘，干燥后的成品為頰粘膜細胞載片，即獲得包被的核周因子抗原。

前述的提升包被核周因子抗原活性的工藝方法，其中，所述選用涂片方法將頰粘膜細胞包被于載玻片對應的孔徑內的操作步驟是，用高壓滅菌后海綿刮取口腔內待脫落頰粘膜細胞，采用離心方式將頰粘膜細胞純化計數，按10萬細胞/ml的濃度進行涂片，每孔涂片量為5至20微升。

前述的提升包被核周因子抗原活性的工藝方法，其中，所述干燥箱的型號為?LEICA?3420。

本發明權利要求1所述提升包被核周因子抗原活性的工藝方法在間接免疫熒光試驗純化中的應用。

本發明提升包被核周因子抗原活性的工藝方法的有益效果，通過改變抗原的處理方式，使抗原的高級結構得以保存，保留更多的抗原決定簇，能夠結合更多的特異性抗體，從而有效提升抗原的反應活性。影響包被核周因子抗原活性的因素有很多，其中頰粘膜細胞純化方法、細胞涂片密度、干燥方法、干燥溫度、干燥時間的選擇至關重要，本發明采用特定的涂片密度、有效的干燥方法和干燥條件獲得的包被核周因子抗原陽性檢出率提高到83.3%，可見與現有技術相比，采用本發明工藝方法能夠有效提升包被核周因子抗原的反應活性。

具體實施方式

本發明提升包被核周因子抗原活性的工藝方法，其包括以下步驟：(1)將取自正常人待脫落的頰粘膜細胞進行分離純化，選用涂片方法將頰粘膜細胞包被于載玻片對應的孔徑內；(2)將恒溫干燥箱調至35±5℃，使涂好的細胞載片在干燥箱內恒溫干燥40分鐘至100分鐘，干燥后的成品為頰粘膜細胞載片，即獲得包被的核周因子抗原。

本發明提升包被核周因子抗原活性的工藝方法，其中，所述選用涂片方法將頰粘膜細胞包被于載玻片對應的孔徑內的操作步驟是，用高壓滅菌后海綿刮取口腔內待脫落頰粘膜細胞，采用離心方式將頰粘膜細胞純化計數，按10萬細胞/ml的濃度進行涂片，每孔涂片量為5至20微升。所述干燥箱的型號為?LEICA?3420。

本發明權利要求1所述提升包被核周因子抗原活性的工藝方法在間接免疫熒光試驗純化中的應用。

實施例1

采用ELISA方法檢測的核周因子抗體陰陽性血清，其中1至30例為陽性樣本血清，31至50例為陰性樣本血清。

A組：使用現有技術包被抗原后的檢測結果。

B組：取材用高壓滅菌后海綿刮取口腔內待脫落頰粘膜細胞，采用離心方式將頰粘膜細胞純化計數，按10萬細胞/ml的濃度進行涂片，每孔涂片量為10微升，獲得的頰粘膜細胞載片就是所要的包被核周因子抗原。

C組：（1）包被：取材用高壓滅菌后海綿刮取口腔內待脫落頰粘膜細胞，采用離心方式將頰粘膜細胞純化計數，按10萬細胞/ml的濃度進行涂片，每孔涂片量為10微升。