[發明專利]一種乙腦/西尼羅嵌合病毒及其應用

無效

• 申請號: 201310343678.5
• 申請日: 2013-08-08
• 公開（公告）號: CN103409376A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 李曉峰;秦成峰;趙慧;鄧永強;姜濤;秦鄂德
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N5/10;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K39/12;A61P31/14
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技術領域

本發明屬于基因工程領域，涉及一種乙腦/西尼羅嵌合病毒及其應用，特別涉及一種以乙腦病毒減毒株為基因骨架的乙腦/西尼羅嵌合病毒及其應用。

背景技術

西尼羅病毒（West?Nile?virus,WNV）是黃病毒科（Flaviviridae）黃病毒屬（Flavivirus）的重要成員。該屬還包括許多重要的人畜共患病病原體，如黃熱病毒（Yellow?Fever?virus，YFV）、流行性乙型腦炎病毒（Japanese?Encephalitis?virus，JEV)、登革病毒（Dengue?virus，DENV）和蜱傳腦炎病毒（Tick-borne?Encephalitis?virus，TBEV）等。西尼羅病毒的貯存宿主是鳥類，通過蚊蟲叮咬而傳播給人類，進而導致西尼羅熱和西尼羅腦炎，后者的病死率高達16%。該病毒起初僅散在流行于東半球的非洲、中西亞、地中海及歐洲地區，1999年首次傳入西半球的美國紐約。據美國CDC報告，截至2012年，美國已有48個州有病例報告，感染人數近8萬人，死亡約1500人。西尼羅病毒已成為美國最重要的腦炎類病毒。我國雖未見該病毒暴發流行，但我國具備西尼羅病毒傳播的生態環境和條件，而且隨著全球氣候的變暖及國際交往的日益頻繁，該病毒傳入我國的危險性也顯著增加。

西尼羅病毒是有包膜的單股正鏈RNA病毒，其基因組含有一個單一開放讀碼框，編碼3種結構蛋白：衣殼蛋白（capsid?protein，C）、膜蛋白及其前體（membrane?protein?and?its?precursor，M/prM）及包膜蛋白（envelope?protein，E），和7種非結構蛋白（NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5）。西尼羅病毒的抗原蛋白主要是包膜蛋白E、膜蛋白M和NS1。E蛋白能誘導產生血凝抑制抗體和中和抗體，是主要的保護性抗原。prM蛋白見于未成熟的病毒顆粒，可能在病毒顆粒成熟過程中作為分子伴侶來協助包膜E蛋白的正確折疊，在此過程中進一步經宿主細胞的蛋白酶切割后成為M蛋白。

目前還無特異有效治療西尼羅病毒感染的藥物，因此疫苗接種仍是預防該病毒感染的最有效途徑。馬用和鵝用的西尼羅病毒疫苗已成功上市。隨著病毒學、分子生物學及相關學科技術的發展，人用西尼羅病毒疫苗的研究也已取得了很大進展。近年來，一些新型的西尼羅病毒疫苗，如重組亞單位疫苗、DNA疫苗和復制子疫苗進展迅速。已有的研究顯示，上述各類疫苗均能有效誘導小鼠和猴體產生免疫應答，并能提供很好的免疫保護。與上述疫苗類型相比，減毒活疫苗因其具有完整的病毒感染過程，進而能全面誘發機體產生體液和細胞免疫應答而更具優勢。隨著反向遺傳學技術的興起和完善，人們可以對疫苗進行理性設計。法國巴斯德研究所構建了以黃熱減毒活疫苗株YF-17D為骨架的黃熱西尼羅嵌合病毒，該疫苗候選株目前已進入II期臨床試驗，可能成為第一個上市的人用西尼羅病毒疫苗。但近年來，因接種YF-17D疫苗株而引發的腦炎病例時有發生，表明該疫苗的安全性還有待進一步提高。

乙型腦炎病毒減毒株SA14-14-2是由野毒株SA14通過在細胞和動物中不斷傳代和多輪空斑純化最終獲得。與野毒株SA14相比，SA14-14-2的毒力明顯減弱，對成鼠和猴等動物的致病性幾乎完全喪失。使用該減毒株研制的乙腦減毒活疫苗在我國使用人群超過3億，未見因疫苗接種而引發疾病的報告，安全性可靠。同時，SA14-14-2遺傳特征穩定，基因組序列明確，與西尼羅病毒基因組具有十分類似的結構特征，非常適合作為基因骨架用于嵌合疫苗的構建。

發明內容

本發明的目的是提供一種以乙腦病毒為基因骨架的乙腦/西尼羅嵌合病毒。

本發明所提供的乙腦/西尼羅嵌合病毒，是將乙腦病毒基因組RNA中編碼乙腦病毒prM-EΔ3蛋白的脫氧核糖核苷酸片段替換為西尼羅病毒基因組RNA中編碼西尼羅病毒prM-EΔ3蛋白的脫氧核糖核苷酸片段后得到的重組病毒。

其中，prM-EΔ3蛋白表示缺失了E蛋白羧基末端3個氨基酸殘基的prM-E蛋白。

在本發明中，所述乙腦病毒具體為乙腦病毒SA14-14-2減毒株；所述西尼羅病毒具體為西尼羅病毒chin-01株。

進一步，所述乙腦病毒prM-EΔ3蛋白為由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白；所述西尼羅病毒prM-EΔ3蛋白為由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質。