[發明專利]一種水稻花藥的收集方法

有效

• 申請號: 201310342737.7
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN103392450A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 馮都華;汪慶;鄧麗;傅俊杰;舒慶堯;崔海瑞;黃建中;孫曉強;吳忠明;呂曉亮
• 申請（專利權）人: 無錫求是生物農業有限公司
• 主分類號: A01D91/04
• 分類號: A01D91/04
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及植物花藥收集方法，尤其涉及一種水稻花藥的收集方法。

背景技術

花藥培養是通過植物組織培養技術，將發育到一定階段的花藥，通過無菌操作技術，接種在人工培養基上，以改變花藥內花粉粒的發育程序，誘導其分化，并連續進行有絲分裂，形成細胞團，進而形成一團無分化的薄壁組織-愈傷組織，或分化成胚狀體，隨后誘使愈傷組織分化成完整的植株。

在我國，水稻花藥培養技術主要應用于三個方面：第一，將花培技術（花藥培養技術）與常規品種間雜交育種相結合，進行新品種的培育，該方面已經取得了顯著的成績。第二，將花培技術用于秈、粳亞種間雜交育種，這方面育成的品種比較多。第三，將花培技術用于雜交水稻提純復壯，用花藥提純更新不育系、保持系，其產量比對照增產10％。目前，將花藥得到的植株用于育種的理論基礎已經建立，水稻已經成為可利用花藥培養技術快速育種的作物。

在水稻的花藥培養中，以單核靠邊期的花粉對誘導單倍體植株較為適宜，此時期對花藥進行培養，誘導效率高，而花粉是否處于單核靠邊期可通過一些形態指標進行判斷和鑒定，如葉枕距、水稻穎殼顏色、雄蕊長度等。

取花藥是水稻花藥培養的第一步也是非常重要的步驟，花藥作為組織培養的原材料，在取花藥時，應可能避免對花藥造成傷害，以免影響誘導效率，同時還需盡量減少污染的幾率，此外還應考慮實驗操作的便捷性。目前，在取花藥時，通常先將稻穗進行消毒，消毒后，在超凈工作臺中，通過眼科剪將稻穗的穎殼扯開，取出花藥后置用眼科鑷將其接種到培養基中進行培養。該方法存在以下問題：（1）操作繁瑣且難度高，勞動強度大，費工費時，不易規模化進行生產操作；（2）在操作過程中，眼科鑷、眼科剪等器具直接接觸花藥或培養基，容易造成接觸污染，引入雜菌，污染培養基，同時也極易對花藥造成損傷，影響愈傷組織誘導率。

發明內容

為克服上述缺陷，本發明提供了一種水稻花藥的收集方法，操作方便，收集效率高且降低了花藥培養的污染幾率。

一種水稻花藥的收集方法，包括：

取稻穗，消毒后去除穎殼的頂端；將稻苞莖稈朝上，穗部朝下使所述的稻穗懸置于收集瓶內，振蕩收集得到所述的花藥。

去除穎殼的頂端時，可采用剪除或切除的方法。

由于水稻的花藥被穎殼包裹，將穎殼的頂端去除，即為花藥的釋放提供了通道，通過振蕩，花藥可在重力的作用下落入收集瓶內。

稻苞抽出的劍葉葉枕到第2葉，穎殼出現淺綠色時從所述稻苞中取出稻穗。此時，水稻的花粉處于單核靠邊期，該時期取水稻的花藥進行離體培養，愈傷組織誘導率高。

消毒前，將所述的稻穗于4～6℃放置4～6天。適當的低溫預處理可減緩花藥壁的退化及褐變，促使花藥脫分化形成愈傷組織。

所述消毒的方法包括：將所述稻穗用70%酒精消毒30s～1min后，將稻穗置于1%的次氯酸鈉中浸泡10～15min。

去除穎殼的頂端時，穎殼去除的部分占所述穎殼的1/3～1/2。若去除的部分少于1/3，則穎殼開口小，花藥不易被振蕩出，影響收集效果；去除的穎殼若大于1/2，則易使花藥受到機械損傷。

所述穗部與收集瓶瓶底之間的距離為2～6cm，優選為3～5cm。距離過小，振蕩所收集的花藥分布范圍較小，造成花藥分布不均勻，局部花藥密度大；而距離過大，花藥容易被振蕩到收集瓶壁上，影響收集效果。

所述的收集瓶內盛裝有瓊脂濾紙。花藥收集到瓊脂濾紙上，瓊脂濾紙將花藥粘附，可直接將瓊脂濾紙轉移進行離體培養，操作方便。

所述收集瓶分為上下兩層，上層設有用于固定所述稻穗的固定裝置，下層盛裝有所述的瓊脂濾紙。將收集瓶設置為兩層，方便了對稻穗進行固定，且由于花藥落入到收集瓶的下層，當花藥收集完畢后，能夠將上下兩層拆開，將盛有花藥的下層轉移進行操作，減少污染幾率。

所述振蕩的頻率為0.1～10赫茲，優選為3～10赫茲。通過控制振蕩的頻率能夠調節花藥的下落速度，但是振蕩頻率過高和過低均不合適，若振蕩頻率過低，則花藥不易落下，影響花藥的收集效率，而振蕩頻率過高則易導致花藥粘到收集瓶內壁，影響收集效果，此外，振蕩頻率過大也易將稻穗上的的雜質振落，影響收集的效果。

所述振蕩的時間為1～30s，優選為8～15s。適宜的振蕩時間能夠保證收集足夠量的花藥，同時也可以避免振蕩時間過長而導致稻穗上雜質的落入。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

（1）與傳統用鑷、剪剝離取花藥的方法相比，本發明通過振蕩即可進行花藥的收集，操作更加方便，收集速度也較其大大提高，可連續大規模采集，不產生任何環境污染。