[發(fā)明專利]蛋白酶

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310342223.1
• 申請(qǐng)日: 2004-06-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103509776B
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 索倫.F.拉森;卡斯滕.肖霍姆;彼得.R.奧斯特加德;卡斯藤.安德森;莫滕.費(fèi)希爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 諾維信公司
• 主分類號(hào): C12N9/52
• 分類號(hào): C12N9/52;C12N15/57;C12N15/75;C12N1/21;A23K20/189;A23K50/80;C11D3/386;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 史悅

1.分離的多肽，其具有蛋白酶活性并具有至少78℃的解鏈溫度(T_m)，如通過(guò)差示掃描量熱法(DSC)在10mM磷酸鈉、50mM氯化鈉緩沖液中，pH?7.0，應(yīng)用1.5℃/分鐘的恒定掃描速率進(jìn)行測(cè)定，其中所述多肽選自：

(a)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ?ID?NO:2的1-188、SEQ?ID?NO:8的1-196、SEQ?ID?NO:10的1-189和/或SEQ?ID?NO:12的1-188的氨基酸具有至少60%的同一性程度；

(b)由核酸序列編碼的多肽，所述核酸序列在低嚴(yán)謹(jǐn)條件下，與SEQ?ID?NO:1的499-1062、SEQ?ID?NO:7的577-1164、SEQ?ID?NO:9的586-1152和/或SEQ?ID?NO:11的502-1065的核苷酸雜交；

(c)由核酸序列編碼的多肽，所述核酸序列與SEQ?ID?NO:1的499-1062、SEQ?ID?NO:7的577-1164、SEQ?ID?NO:9的586-1152和/或SEQ?ID?NO:11的502-1065的核苷酸中的任一個(gè)具有至少60%的同一性程度；

(d)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ?ID?NOs:2、8、10或12中任一個(gè)的成熟肽的同一性程度為至少大約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少99%。

(e)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至188或者SEQ?ID?NO:8的氨基酸1至196的的差異不超過(guò)10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超過(guò)1個(gè)氨基酸；和/或

(f)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列具有SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至188，SEQ?ID?NO:8的氨基酸1至196，SEQ?ID?NO:10的氨基酸1至189和/或SEQ?ID?NO:12的氨基酸1至188的氨基酸序列，包括取代、缺失和/或插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸。

2.權(quán)利要求1的多肽，其是擬諾卡氏菌屬(Nocardiopsis)蛋白酶，優(yōu)選是源自達(dá)松維爾擬諾卡氏菌達(dá)松維爾亞種(Nocardiopsis?dassonvillei?subsp.dassonvillei)DSM?43235的蛋白酶、源自擬諾卡氏菌屬菌種(Nocardiopsis?sp.)DSM?16424的蛋白酶或者是源自Nocardiopsis?alba?DSM?15647的蛋白酶。

3.權(quán)利要求1的多肽，其中所述的氨基酸差異是保守的氨基酸取代。

4.權(quán)利要求1的多肽，其中所述氨基酸序列在所述的指定位點(diǎn)包含至少一個(gè)下列的氨基酸：10Y、24S、38T、42G、49T、51T、53Q、54N、82S、86Q、87S、89T、91T、92S、96A、99A、118N、120T、122R、125Q、129Y、130S、131L、135N、147F、151S、165S、166V、171Y、179I和/或186I；優(yōu)選10Y、38T、82S、99A、118N、120T、122R、125Q、129Y、130S、131L、165S和/或171Y；更優(yōu)選與95P、100V和/或114I中的至少一個(gè)一起；和/或與(H35+D61+S143)一起；其中每個(gè)位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO:2的位點(diǎn)。

5.權(quán)利要求1的多肽，其中所述氨基酸序列在所述的指定位點(diǎn)包含至少一個(gè)下列的氨基酸：25S、38T、42P、44S、49Q、54R、62S、89S、91S、92S、95A、99Q、100I、114V、120T、125Q、129Q、131L、135N、147F、151S、165S、166F、171Y、176N、179L、180S、184L和/或185T；優(yōu)選25S、38T、42P、44S、54R、62S、125Q、131L、165S、171Y、176N、179L、180S、184L和/或185T；更優(yōu)選與24A、51V、53E、86A、87T、96I和/或186L中至少一個(gè)一起，和/或與(H35+D61+S143)一起；其中每個(gè)位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于SEQ?ID?NO:12的位點(diǎn)。

6.分離的核酸序列，包括編碼權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的多肽的核酸序列。