[發明專利]牛脂肪酸轉運蛋白1基因啟動子熒光素酶質粒的構建方法

無效

• 申請號: 201310340744.3
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN103509811A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 許厚強;龔婷;陳偉;陳祥;趙佳福
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12N15/66
• 分類號: C12N15/66;C12N15/53
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 李亮;程新敏

1.一種牛脂肪酸轉運蛋白1基因啟動子熒光素酶質粒的構建方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）利用生物信息學軟件分析牛FATP1基因5’側翼啟動子序列，預測出核心啟動子序列和轉錄因子結合位點；

（2）根據pGL3-Basic真核表達載體中多克隆位點區，結合已獲得啟動子片段以及限制性內切酶酶切反應效率，選取Kpn?和Xho?兩種限制性內切酶酶切位點用于構建pGL3-Basic-Promoter真核表達載體；設計帶有酶切位點的特異性引物，將酶切位點分別加在上下游引物的5’端，并在酶切位點的5’端添加2～3個保護性堿基；

（3）將包含牛FATP1基因第一外顯子的5’側翼啟動子序列插入pMD19-T載體，構建包含牛FATP1基因第一外顯子的5’側翼啟動子序列的pMD19-T-Promoter載體；

（4）將牛FATP1基因啟動子片段插入pGL3-Basic載體的Kpn?與Xho?位點間，構建牛FATP1基因啟動子熒光素酶報告基因質粒pGL3-Basic-Promoter。

2.根據權利要求1所述的牛脂肪酸轉運蛋白1基因啟動子熒光素酶質粒的構建方法，其特征在于：步驟（2）中所述的帶有酶切位點的特異性引物包括，上游引物5'-GGGGTACCGCATCCCCACTCAACTAATAC-3'，以及下游引物5'-CCGCTCGAGCCACAG?AGTCCTTTATTTGC-3'，帶下劃線的序列為引入的兩個帶保護堿基的酶切位點Kpn?和Xho?位點。