[發明專利]基于納米金信號放大的人呼吸道合胞病毒檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310340672.2
• 申請日: 2013-08-06
• 公開（公告）號: CN103399148A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 黃承志;詹蕾
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 康海燕

1.基于納米金信號放大的人呼吸道合胞病毒檢測試劑盒，其特征在于：包括RSV參考品，RSV多克隆抗體，金納米粒子酶標RSV抗體復合物；所述的RSV參考品為RSV病毒抗原，抗原濃度為60～80pg/mL；所述的金納米粒子酶標RSV抗體復合物為以金納米粒子作為載體的辣根過氧化物酶標記的RSV多克隆抗體，抗體濃度為0.83～1.67μg/mL。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的抗體濃度為0.9μg/mL。

3.如權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：還包括洗滌液、稀釋液、封閉液、顯色液、終止液。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：所述的洗滌液為含有0.3～0.6v/v‰Tween-20的磷酸鹽緩沖液，pH7.2～7.8。

5.如權利要求3或4所述的試劑盒，其特征在于：所述的封閉液是含有牛血清蛋白的洗滌液，牛血清蛋白的濃度為0.3～1g/mL。

6.如權利要求3～5任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述的稀釋液是含有牛血清蛋白的洗滌液，牛血清蛋白的濃度為0.75～1.25mg/mL。

7.如權利要求3～6任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述的顯色液是含有四甲基聯苯胺和過氧化氫的檸檬酸緩沖液，pH4～5，四甲基聯苯胺的濃度為0.095～0.15mg/mL，過氧化氫的濃度為0.63～0.66mmol/L。

8.如權利要求3～7任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述的終止液為濃度1mol/L～2mol/L的硫酸溶液。

9.如權利要求1～8任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述的RSV病毒抗原采用如下方法制備得到：培養Hep-2或者A549作為RSV宿主細胞，待細胞密度達到80%～90%，加入病毒，35～37℃培養4～6天，細胞出現驟縮、拉網、變小、變圓時，倒出培養液，加入磷酸鹽緩沖液，-70～-80℃和室溫反復凍融2～3次，2000～3000rpm，4～8℃，離心10～15min，收集上清液，-70～-80℃保存。

10.如權利要求3～9任一項所述的試劑盒，其特征在于：所述的金納米粒子酶標RSV抗體復合物的制備方法包括如下步驟：

a、13～15nm金納米粒子的合成：超純水中加入氯金酸，攪拌加熱至沸騰，迅速加入檸檬酸三鈉溶液，繼續攪拌加熱回流20～30min，待溶液顏色穩定，形成酒紅色停止加熱，繼續攪拌冷卻至室溫，0.22～0.45μm濾膜過濾，0～4℃保存備用，所得金納米粒子粒徑為13～15nm；其中超純水與氯金酸的體積比為97～99︰3.9～4.1，其中氯金酸的質量濃度為1%，超純水與氯金酸的體積比為97～99︰11～11.6，檸檬酸三鈉溶液的質量濃度為1%；

b、金膠酶標抗體偶聯：步驟a制備的13nm金納米粒子溶液與辣根過氧化物酶標記的RSV多克隆抗體（anti-RSV-HRP），混合均勻，室溫（24～26℃）孵育15～30min，再向其中加入與前述混合液等體積的封閉液，室溫繼續孵育15～30min，14000～16000rpm，離心12～20min，去除上清液，稀釋液重懸沉淀并洗滌一次，最后用稀釋液重懸至濃度為0.83～1.67μg/mL；其中，金納米粒子溶液與辣根過氧化物酶標記的RSV多克隆抗體的體積比為19～21︰0.8～2。