[發明專利]microRNA-26a在制備預防或治療肺纖維化藥物中的應用

有效

• 申請號: 201310339650.4
• 申請日: 2013-08-06
• 公開（公告）號: CN103394099A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 楊寶峰;單宏麗;梁海海;呂延杰
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P11/00
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;韓小雷

技術領域

本發明涉及一種內源性的非編碼小RNAs的新醫藥用途，尤其涉及microRNA-26a在預防和治療肺纖維化疾病中的用途，屬于肺纖維化疾病的預防和治療領域。

背景技術

特發性肺纖維化（IPF）是一種病因不明的慢性間質性肺疾病，其病理改變以肺泡上皮損傷、炎性細胞蓄積、成纖維細胞增殖以及細胞外基質的沉積為主要特征，最終引起肺的彈性和肺泡表面積的喪失，而導致氣體交換和肺功能的損害。其臨床表現為進行性呼吸困難并伴有刺激性干咳，最終因呼吸衰竭而死亡。IPF發病率高，存活率低，預后差，確診后平均存活3～5年，其5年生存率不超過50%，對人類健康和生命危害極大。然而，肺纖維化發病機制尚不清楚，且無有效的治療方法。

肺纖維化是一個高度流行的疾病，多種臨床用藥（如博來霉素、胺碘酮等）均會導致患者出現肺纖維化。肺纖維化具有較高的發病率，死亡率，并導致社會經濟負擔加重。關于肺纖維化的預防、診斷和治療工作，目前尚存在巨大的不足。miRNAs在人類疾病病理過程中的作用近來已經逐漸被揭示。

肺纖維化的直接病因是肌成纖維細胞分泌的膠原含量增加，由于肌成纖維細胞細胞來源的多樣性，因此目前為止針對單一靶點的藥物治療，尚不能達到讓人滿意的效果。隨著近來microRNAs研究的熱潮，這種內源性的非編碼小RNAs已經作為一個基因表達調節的中心因子，參加許多重要的生理過程。單一microRNA可負向調控多個基因的表達，可為纖維化肺疾病的防治帶來新的希望，因此發現不同病理生理情況下起關鍵調節作用的microRNA亞型變化，并闡明其功能，將會對該疾病的治療帶來新的靶標和產生新的干預策略。盡管越來越多的microRNAs作為人類疾病的生物標志物、決定因素和治療靶點被發現，但在肺纖維化中的關鍵microRNA亞型仍沒有確定，其所發揮的功能以及針對特定疾病的靶向性給藥途徑仍是對該領域科研人員的挑戰。因此，本發明試圖證明microRNA-26a在肺纖維化中的改變及其作用，探索microRNA-26a對肺纖維化的治療作用，為臨床肺纖維化患者帶來希望。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是確定microRNA-26a在肺纖維化中的改變，及其致病作用，并將其作為一種新型的藥物作用靶點，應用于預防以及治療肺纖維化疾病之中。

本發明人通過大量的實驗證明在實驗性肺纖維化小鼠及臨床肺纖維化患者中microRNA-26a（miR-26a）表達顯著下調。通過使用膽固醇連接的antagomiR-26a或鎖核苷酸技術修飾的LNA-AMO-26a特異性抑制miR-26a可引起小鼠肺纖維化。更為重要的是，本發明還發現通過使用膽固醇連接的agomiR-26a或鎖核苷酸技術修飾的LNA-miR-26a在肺組織中過表達miR-26a，可以有效減輕實驗性肺纖維化的發生。而且相對于以往實驗中用到的腺病毒轉染發，膽固醇及鎖核苷酸修飾的microRNA更加安全。

在此研究的基礎上，本發明提出了microRNA-26a在制備預防或治療肺纖維化藥物中的應用，其中所述的microRNA-26a的核苷酸序列如下所示：

microRNA-26a：5’-UUCAAGUAAUCCAGGAUAGGCU-3’（SEQ?ID?NO.1）。

優選的，所述的microRNA-26a的5’端連接有膽固醇，或所述的microRNA-26a為鎖核苷酸。

上述研究結果，為肺纖維化的發生提供了一個新的病理生理學機制，并可用于肺纖維化疾病的預防與治療。

附圖說明

圖1為肺纖維化中miR-26a的變化；

A病理染色（HE及Masson染色）顯示肺纖維化小鼠模型建立成功；B纖維化小鼠肺組織中羥脯氨酸含量增加；C纖維化小鼠肺組織中膠原含量增加；D纖維化小鼠肺組織中miR-26a表達降低；E臨床肺纖維化患者肺組織中miR-26a表達顯著降低；

圖2為特異性敲減miR-26a可誘導小鼠肺纖維化的發生；

A?Real-time?PCR評價antagomiR-26a的抑制效率；B病理染色檢測小鼠肺組織膠原沉積；C?Image?Pro?Plus軟件統計小鼠纖維化面積；D、E評價小鼠肺組織中羥脯氨酸及膠原含量變化；

圖3為miR-26a可有效預防肺纖維化的發生；

A小鼠給藥模式圖；B利用病理染色評價小鼠肺部膠原沉積；C統計小鼠肺部纖維化面積；D、E檢測小鼠肺組織中羥脯氨酸及膠原含量；