[發(fā)明專利]抗體純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310336508.4
• 申請日: 2009-05-15
• 公開（公告）號: CN103396480A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: B.R.尼爾森;H.克里斯滕森;D.E.拉斯姆森;T.B.漢森;J.S.尼爾森;E.哈爾克杰爾;R.C.尼爾森;C.杰斯帕斯加爾德;A.斯塔比
• 申請（專利權(quán)）人: 諾沃—諾迪斯克有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/22
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 劉辛;萬雪松

本申請是2009年5月15日提交的題為“抗體純化方法”的國家申請?zhí)枮?00980118361.3(PCT/EP2009/055900)的發(fā)明專利申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及重組表達(dá)抗體的純化。

背景技術(shù)

抗體純化方法通常基于捕獲親和色譜，通常為Protein?A，然后是離子交換和/或疏水作用和/或混合模式色譜步驟。此類方法通常還包括至少兩個(gè)病毒清除步驟，通常通過親和步驟洗脫液的低pH和在所述方法合適位置放置病毒過濾器清除。mAb純化方法去除的雜質(zhì)包括半抗體、抗體片段、二聚體、以及聚集體、DNA、病毒、HCP、Protein?A滲漏物、內(nèi)毒素以及其它相關(guān)雜質(zhì)。

Protein?A為一種最初發(fā)現(xiàn)于細(xì)菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcus?aureus)細(xì)胞壁的40-60kDa表面蛋白。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，由于其結(jié)合免疫球蛋白，尤其是IgG的能力，該蛋白已用于生物化學(xué)研究。該蛋白通過與重鏈相互作用結(jié)合免疫球蛋白的Fc區(qū)域。

WO9856808和WO2005016968描述了Protein?A純化的示例。

Protein?A純化還描述于WO2004076485、US20070060741和Kelley?BD?Biotechnol?Bioeng.101.(3).553-66(2008)。

持續(xù)需要工業(yè)生產(chǎn)重組抗體的有效方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種從懸浮液中純化抗體復(fù)合物的方法，所述懸浮液包含所述抗體復(fù)合物，其中

i)所述懸浮液在某些條件下接觸Protein?A衍生物/類似物，其中所述Protein?A衍生物/類似物結(jié)合所述抗體復(fù)合物，

ii)使用合適的緩沖液洗滌所述Protein?A衍生物/類似物結(jié)合的抗體，以及

iii)使用合適的緩沖液將所述抗體復(fù)合物從所述Protein?A衍生物/類似物洗脫并收集在所得洗脫物中。

本發(fā)明涉及一種從懸浮液中純化抗體復(fù)合物的方法，所述懸浮液包含所述抗體復(fù)合物，其中

i)所述懸浮液在某些條件下接觸對所述抗體具有親和力的配體，其中所述配體結(jié)合所述抗體復(fù)合物，

ii)使用合適的緩沖液洗滌所述配體結(jié)合的抗體，

iii)使用合適的緩沖液將所述抗體復(fù)合物從所述配體洗脫并收集在洗脫物中，以及

來自步驟iii)的洗脫物進(jìn)行陽離子色譜。

本發(fā)明涉及一種抗體純化平臺，所述平臺包含根據(jù)本發(fā)明的方法。

本發(fā)明涉及一種工業(yè)生產(chǎn)抗體的方法，其中所述方法包含根據(jù)本發(fā)明的方法。

詳細(xì)說明

抗體純化的常規(guī)方法為本領(lǐng)域所熟知，例如Pete?Gagnon：Purification?Tools?for?monoclonal?Antibodies(單克隆抗體的純化工具)(1996)ISBN-9653515-9-9中描述的方法。本發(fā)明涉及開發(fā)抗體復(fù)合物純化的新方法。在本申請上下文中，抗體復(fù)合物為免疫球蛋白。術(shù)語“免疫球蛋白”系指一種分子，其屬于一類結(jié)構(gòu)相關(guān)的糖蛋白，由兩對多肽鏈組成，一對輕(L)鏈和一對重(H)鏈，全部4條鏈通過二硫鍵相互連接。免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)已充分鑒定。參見例如Fundamental?Immunology?Ch.7(Paul，W.，編輯，第2版.Raven?Press，N.Y.(1989))。簡而言之，每條重鏈通常由重鏈可變區(qū)(V_H)和重鏈恒定區(qū)(通常包含3個(gè)結(jié)構(gòu)域，C_H1、C_H2、和C_H3)組成。每條輕鏈通常由輕鏈可變區(qū)(V_L)和輕鏈恒定區(qū)(通常包含1個(gè)結(jié)構(gòu)域，C_L)組成。

在本發(fā)明上下文中術(shù)語“抗體復(fù)合物”系指免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子片段、或者兩者之一的衍生物，其具有在通常生理?xiàng)l件下長時(shí)間特異性結(jié)合抗原的能力，結(jié)合時(shí)間例如至少約30分鐘，至少約45分鐘，至少約1小時(shí)，至少約2小時(shí)，至少約4小時(shí)，至少約8小時(shí)，至少約12小時(shí)，約24小時(shí)或更長，約48小時(shí)或更長，約3、4、5、6、7或更多天等等，或者任何其它相關(guān)功能限定的時(shí)間(例如足以引發(fā)、促進(jìn)、增強(qiáng)、和/或調(diào)節(jié)與抗體結(jié)合抗原相關(guān)的生理反應(yīng)的時(shí)間)。

免疫球蛋白分子重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。抗體(Abs)的恒定區(qū)可能介導(dǎo)免疫球蛋白結(jié)合宿主組織或因子，其包括免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分(C1q)。