[發(fā)明專利]一種大菱鲆致病菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310335557.6
• 申請(qǐng)日: 2013-08-04
• 公開（公告）號(hào): CN103361293A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭風(fēng)榮;王波;林學(xué)政;劉洪展;殷樹淼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家海洋局第一海洋研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A61K39/106;A61P31/04;C12R1/63
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國(guó)

1.一種大菱鲆致病菌株，為鰻弧菌（Vibrio?anguillarum），其保藏編號(hào)為?CGMCC?NO.7733。?

2.權(quán)利要求1所述的鰻弧菌用于制備滅活疫苗。

3.一種滅活疫苗，所述的滅活疫苗是由權(quán)利要求1所述的鰻弧菌制備的。

4.如權(quán)利要求2所述的滅活疫苗，其特征在于，除滅活的鰻弧菌外，還包括有滅活的副溶血弧菌。

5.如權(quán)利要求4所述的滅活疫苗，其特征在于滅活疫苗中滅活的鰻弧菌和滅活的副溶血弧菌的濃度分別為10⁷-10^10?CFU/ml。

6.權(quán)利要求4或5所述的疫苗用于預(yù)防大菱鲆爛邊病。

7.權(quán)利要求4所述的滅活疫苗的制備方法，其步驟如下：

首先，將鰻弧菌接種于含有3%NaCl的LB液體培養(yǎng)基中，再將副溶血弧菌株接種于含有3%NaCl的LB液體培養(yǎng)基中，28?C震蕩培養(yǎng)12-16小時(shí)，待菌液濃度達(dá)10⁹CFU/ml或分光光度計(jì)檢測(cè)OD600達(dá)到0.6以上時(shí)終止培養(yǎng)，獲得菌株的擴(kuò)大培養(yǎng)液；

然后，對(duì)鰻弧菌和副溶血弧菌的擴(kuò)大培養(yǎng)液進(jìn)行滅菌處理，按體積比0.5%將鰻弧菌和/或副溶血弧菌的擴(kuò)大培養(yǎng)液加入甲醛溶液，室溫滅活24-48小時(shí)，期間震蕩5-10次，每次10-15分鐘，得到菌株的滅活菌液；

最后，將菌株的滅活菌液于8000g、4?C離心15分鐘，棄上清液，將沉淀用滅菌磷酸鹽緩沖液PBS洗滌3次，收集菌體，滅菌PBS重懸菌液，再鰻弧菌和副溶血弧菌液混合，將混合菌液涂布于高鹽營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，24-48小時(shí)候未見菌落長(zhǎng)出，即制得滅活疫苗，存放于4?C備用。