[發明專利]一種雜交瘤細胞株、鼠抗人β-tubulin-3單克隆抗體及其免疫組化試劑盒和應用

無效

• 申請號: 201310335542.X
• 申請日: 2013-08-05
• 公開（公告）號: CN103436495A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 殷瑛;劉勁松;喻德華
• 申請（專利權）人: 武漢海吉力生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 武漢帥丞知識產權代理有限公司 42220
• 代理人: 朱必武

技術領域

本發明涉及一種雜交瘤細胞株、鼠抗人β-tubulin-3單克隆抗體及其免疫組化試劑盒和應用，用于醫學研究和檢測非小細胞肺癌患者化療時針對紫杉醇的耐受性，指導臨床用藥。?

背景技術

????肺癌是腫瘤導致死亡的最常見原因，其中約80％為非小細胞肺癌（non?small?cell?lung?cancer，NSCLC），在新診斷的患者中，有65％已不能行手術治療，因此化療是肺癌的主要治療手段之一，但治療的有效率僅為20％～40％，中位生存期不足10個月。隨著第３代化療藥物的出現和應用，肺癌的治療效果有了進一步的提高，但并未取得突破性進展，而這些第3代化療藥物與鉑類聯合的化療療效似乎已經達到一個平臺。隨著對功能性基因組研究的深入，近年來提出了腫瘤個體化治療的新理念，在2009年美國臨床腫瘤學會（ASCO）年會中提出NSCLC?治療更應遵循這一原則。個體化治療是根據腫瘤生物學和藥物基因組學的改變進行針對性治療。這是建立在循證醫學基礎上，從而在分子、蛋白、基因水平上指導肺癌治療，是目前肺癌治療的理想之路。?

微管蛋白（tubulin）不僅是細胞骨架和紡錘體的主要成分，而且是紫杉醇作用的位點，與紫杉醇的獲得性耐藥也密切相關。目前在真核物中已經確定的微管蛋白有７?種，其中α-tubulin?和β-tubulin?是微管結構的主要組成，在真核生物細胞中普遍存在，并且高度保守性。一些基礎和臨床研究證實，β-tubulin-3?的表達與紫杉醇化療敏感性相關，可作為一些實體腫瘤（肺癌、卵巢癌、前列腺癌乳腺癌、不明原發部位的腫瘤）預后的評價指標。Dumontet?等(P?Seve,C?Dumontet.Is?class?III?beta-tubulin?a?predictive?factor?in?patients?receiving?tubulin-binding?agents.?The?Lancet?Oncology?.?2008)在19例NSCLC?患者β-Iubulin?Ⅲ?表達與預后關系的研究中發現，β-Tubulin?Ⅲ?高水平表達患者的無疾病生存期為41d?，明顯低于β-Iubulin?Ⅲ?低表達者的288d?。在9例高表達β-Iubulin?Ⅲ?患者中僅有2例對化療敏感（22％），而在低水平表達的患者中化療敏感率為60％（6/10），提示接受以紫杉醇為基礎化療方案的NSCLC?患者，β-Iubulin?Ⅲ?表達增高可能表示預后不良，而β-Iubulin?Ⅲ?表達降低則對紫杉醇敏感性增加。Seve?等研究也得到類似結果，β‐tubulin?高表達與紫杉醇耐藥有關。Azuma?等(Azuma?K,Sasada?T,Kawahara?A,et?al.Expression?ofERCC1?and?class?III?beta-tubulin?in?non-small?cell?lungcancer?patients?treated?with?carboplatin?and?paclitaxel.?Lung?Cancer?.?2009)用免疫組化的方法檢測了45例接受紫杉醇聯合卡鉑化療的復發NSCLC?的ERCC１和β-tubulin?Ⅲ?表達情況，發現二者各自的低表達均與高有效率和延長無疾病生存期有關，而且兩者均陰性者從化療中的獲益更明顯。另外，β-tubulin?Ⅲ的表達水平不與任何臨床和病理特點相關。?

隨著功能性基因組學的發展，人們對癌變機制和腫瘤治療機制有了更深層次的理解。選擇安全有效的治療方法，實現肺癌個體化治療，讓患者生存時間更長，生活質量更好，是肺癌治療的一種必然趨勢。個體化化療在NSCLC?治療中已經顯示良好的效果和應用前景，代表了腫瘤化療的發展方向，已在腫瘤界獲得廣泛肯定，給腫瘤治療帶來曙光。?

基于上述研究，申請人采用傳統雜交瘤法研發出針對β-tubulin-3的單克隆抗體及其免疫組化試劑盒。該試劑盒能對肺癌患者進行β-tubulin-3診斷，對于確定正確的治療方案和降低死亡率具有巨大的社會經濟意義。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種鼠抗人β-tubulin-3單克隆抗體雜交瘤細胞株、單克隆抗體，可以為非小細胞肺癌患者在使用紫杉醇化療時提供臨床依據及個體化診療方案，以減少患者由于盲目用藥而造成的經濟損失，以及避免由于錯誤用藥而引起的生理傷害和病情延誤。?

為了解決上述技術問題，本發明人通過大量實驗研究并探索，最終獲得了如下技術方案：?