[發明專利]甘肅肉用綿羊多胎品系的培育方法

有效

• 申請號: 201310335518.6
• 申請日: 2013-08-05
• 公開（公告）號: CN103404483A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 劉建斌;孫曉萍;郭健;王凡;張萬龍;馮瑞林;岳耀敬;郎俠;楊博輝;郭婷婷;曾玉峰;王宏博
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及動物育種技術領域，特別是涉及利用國內小尾寒羊多胎品種和引進肉用綿羊無角道賽特和波德代品種資源，進行甘肅肉用綿羊多胎新品系的培育方法。

背景技術

繁殖和生長發育是肉用綿羊的重要經濟性狀，特別是產羔數和生長速度是決定甘肅河西走廊半農半牧區養羊業效益的重要因素。小尾寒羊是我國世界著名的稀有地方多胎綿羊品種之一，其多胎性很早就引起許多綿羊育種科學家的關注，對其內分泌機制和表型特點已進行了深入廣泛的研究，控制小尾寒羊多胎的主效基因(Fec^B基因)實質是綿羊骨形態發生蛋白受體IB基因(Bone?morphogenetic?protein?receptor?IB，BMPR-IB)編碼區746位上發生了A→G單堿基突變，使受體細胞內激酶區編碼蛋白由野生型的谷胺酰氨突變為小尾寒羊多胎的精氨酸(Q249R)。因此，BMPR-IB基因是小尾寒羊多胎產羔數的主效基因之一。充分利用引進肉用綿羊無角道賽特和波德代生長發育快、飼料報酬高、產肉量多且性能好等優點，全面發揮作為父本的無角道賽特和波德代以及作為母本的小尾寒羊多胎品種的優良特性，培育出產羔率高、產肉性能好、生長發育快、體格高大和適應性強的甘肅肉用綿羊多胎新品系。

發明內容

本發明公開了一種甘肅肉用綿羊多胎新品系的培育方法，由作為父本的無角道賽特和波德代分別與作為母本且攜帶突變重合基因型(BB)的小尾寒羊進行雜交，選留一代優秀且攜帶突變重合基因型(BB)或突變雜合基因型(B+)的雜交母羊(波寒一代和道寒一代)；以選留的一代雜交母羊波寒一代和道寒一代分別與無角道賽特和波德代種羊進行雜交，選留二代優秀且攜帶突變重合基因型(BB)或突變雜合基因型(B+)的雜交公羊(道波寒二代和波道寒二代)和母羊(道波寒二代和波道寒二代)；由選留一代雜交母羊和二代雜交母羊分別與選留的二代雜交公羊交配，生產出甘肅肉用綿羊多胎新品系零世代羊；從零世代羊中選留優秀且攜帶突變重合基因型(BB)或突變雜合基因型(B+)的公羊和母羊；采用群體繼代選育法和分子標記輔助選擇法進行4個世代的橫交固定，得到甘肅肉用綿羊多胎新品系。本培育方法選育的甘肅肉用綿羊多胎品系具有產羔率高、產肉性能好、生長發育快、體格高大和適應性強等優點，適合甘肅河西走廊半農半牧區舍飼和圈養育肥，符合甘肅養羊業發展趨勢。

附圖說明

圖1：甘肅肉用綿羊多胎品系培育方案。

具體實施方式

1、小尾寒羊母羊的選擇

(1)選擇體格健康的小尾寒羊，對每只預選小尾寒羊采集血樣5mL，并進行耳標標記記錄；

(2)對采集的小尾寒羊血樣利用高分辨率熔解曲線分析技術(HRM)進行BMPR-IB基因檢測，確定BMPR-IB基因編碼序列第746位堿基處發生了Q249R突變的綿羊個體，即攜帶突變重合基因型(BB)的小尾寒羊個體作為甘肅肉用綿羊多胎新品系的母本(1500只)。

2、利用HRM技術對BMPR-IB基因進行檢測

(1)利用LightScanner?Primer?Design?Software(Idaho公司，美國)設計用于HRM法SNP位點基因型檢測的引物。

上游：5′-AGATTGGAAAAGGTCGCTATG-3′

下游：5′-ACCCTGAACATCGCTAATACA-3′

(2)HRM-PCR擴增體系(11μL)

20ng·μL-1的基因組DNA1μL，10pmol的上下游引物各0.2μL，2×Taq?PCR?MasterMix(內含TaqDNA聚合酶、Mg²⁺、dNTPs等)(北京，天根)5μL，滅菌超純凈水3.6μL，10×LC?Green飽和染料(美國，Idaho)1μL。

(3)HRM-PCR反應程序

95℃預變性5min；94℃變性20s，Tm復性20s，72℃延伸20s，35個循環；72℃延伸53min，15℃保存。

(4)高低溫內標稀釋方法

1OD內標單鏈+400μL水。

(5)高低溫內標退火體系

飽和氯化鈉1μL，內標互補雙鏈各1μL，補水至10μL，95℃水浴3min，然后緩慢降至室溫。

(6)HRM熒光信號采集