[發明專利]OX26/CTX-PL/pC27復合物及其在治療神經膠質瘤中的應用

有效

• 申請號: 201310335451.6
• 申請日: 2013-08-05
• 公開（公告）號: CN103405783A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 彭英
• 申請（專利權）人: 中山大學孫逸仙紀念醫院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/42;A61K47/34;A61K9/127;A61P35/00
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 莫瑤江

技術領域

本發明涉及納米基因載體領域，具體涉及一種既可以通過血腦屏障，又能靶向作用于神經膠質瘤的納米基因載體OX26/CTX-PL/pC27復合物及其構建方法和應用。?

背景技術

神經膠質瘤（glioma）是最常見的原發性顱內腫瘤，其年發病率為十萬分之六。盡管近30年來在膠質瘤手術、化療與放療方面取得很大的進步，但惡性膠質瘤患者的中位生存期只有14.6個月。因此，神經膠質瘤的臨床治療仍是一個需要研究和探索的難題。?

神經膠質瘤治療失敗的一個重要原因是抗腫瘤藥物難以通過血腦屏障到達腦實質。而傳統的基因載體，包括納米載體，不具有透過血腦屏障的能力，這嚴重限制了基因治療在膠質瘤中的應用。為實現基因治療神經膠質瘤，有人采用腦內局部注射法，但局部注射為有創性，治療往往需要反復給藥，且藥物作用也局限于注射部位附近，所以該方法在臨床應用中有一定困難。因此，研究者們一直在尋找可以通過靜脈給藥途徑進入腦的基因載體。?

現有的研究中，雖然已經有靶向納米載體的開發應用研究，比如免疫脂質體，靶向修飾的PEG化的PAMAM樹狀高分子等，但腦膠質瘤靶向作用也僅限于通過血腦屏障，從而實現目的基因在腦內腫瘤細胞和非腫瘤細胞中廣泛表達。再者，更多的納米載體傾向于對化療藥物，如阿霉素，紫杉醇等傳統藥物的腦靶向遞送，靶向納米基因載體的研究少見。?

脂質體作為有效的基因遞送載體，經靜脈注射后很快被循環中的單核巨噬細胞系統清除；而PEG外殼能降低血清蛋白調理作用，增加脂質體在循環中的穩定性，延長循環時間。血腦屏障內皮細胞表達豐富的特異性受體，其中轉鐵蛋白受體（transferrin?receptor，TfR）特異性的單克隆抗體OX26可通過受體介導的跨細胞轉運通過血腦屏障。氯毒素（chlorotoxin，CTX）是具有36個氨基酸分子量為4k?Da的小分子肽，對非脊椎動物有劇毒，但對哺乳動物是無毒的。能與一系列來源于神經外胚層的癌細胞結合，而這種結合依賴于細胞膜表面的基質金屬蛋白酶2（MMP-2）。以上PEG化脂質體、OX26和CTX的特性已經在其他體外和體內研究中得到證實。?

hTERTC27是人端粒酶逆轉錄酶（hTERT）的C端的27kD的多肽，85％以上的人腫瘤組織中都有端粒酶活性的表達，而與腫瘤相鄰的正常組織或良性病變很少表達。hTERTC27可造成端粒功能紊亂和分裂后期的染色體末端融合，已經證實hTERTC27具有良好的抑瘤作用。?

發明內容

本發明的目的在于根據目前用于治療神經膠質瘤的藥物難以通過血腦屏障、腦內局部注射法在臨床應用中存在困難等諸多缺陷，提供一種可以通過靜脈給藥的、既可以透過血腦屏障，又對神經膠質瘤具有靶向性作用的OX26/CTX偶聯的PEG化的脂質體/pC27復合物，該復合物可以安全有效的治療神經膠質瘤。?

本發明另一目的在于提供上述OX26/CTX偶聯的PEG化的脂質體/pC27復合物的構建方法。?

本發明還有一個目的在于提供上述OX26/CTX偶聯的PEG化的脂質體/?pC27復合物在制備治療神經膠質瘤藥物中的應用。?

本發明上述目的通過以下技術方案予以實現：?

OX26/CTX偶聯的PEG化的脂質體/pC27復合物（又稱OX26/CTX-PL/pC27），是以轉鐵蛋白蛋白受體抗體OX26和CTX作為靶向修飾的配體，以hTERTC27作為神經膠質瘤的治療基因，以PEG化脂質體作為載體骨架得到的納米基因載體。?

上述OX26/CTX-PL/pC27復合物的構建是本發明的關鍵。要將OX26和CTX以適當的比例成功地連接于PEG末端形成穩定的復合載體，并要控制其粒徑在合適范圍，所以需要對反應條件進行摸索，還要對脂質體的處方工藝進行優化篩選，找出最適合的反應配比、濃度、溫度和時間等。最終通過反向蒸發法合成了平均粒徑約120nm，PDI為0.2和平均zeta電勢為12.8mv的雙靶向基因載體復合物。該復合物有較高的包封率，適宜的配體蛋白偶聯率，表明所制備的復合物具備了較理想的體外指標，為其后續的體內外研究奠定了基礎。?