[發(fā)明專利]一種鼠李糖乳桿菌及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310335282.6
• 申請(qǐng)日: 2013-08-03
• 公開（公告）號(hào): CN103421715A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王浩;彭虹旎;甄麗;陳琳;楊景玉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島蔚藍(lán)生物集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A61K35/74;A61P37/04;A23L1/29;C12R1/225
• 代理公司: 青島海昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國(guó)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鼠李糖乳桿菌，及其在抑菌和增強(qiáng)免疫力中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

人體內(nèi)腸道菌群數(shù)量巨大，總共約有10¹⁴個(gè)，并且種類繁多，大約有400多種細(xì)菌。腸道菌可以分為有益菌、有害菌和中性菌。有害菌對(duì)人體的危害主要是它們分解蛋白質(zhì)和脂肪，產(chǎn)生大量氨、胺及亞胺、吲哚、酚類等有害健康的物質(zhì)。這些有害物質(zhì)會(huì)引起腸道不適，加重肝臟負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致免疫力下降，誘發(fā)癌癥。而有益菌可以發(fā)酵碳水化合物生成有機(jī)酸，從而使腸道保持微酸性，抑制有害菌的生長(zhǎng)。當(dāng)人體腸道腸道內(nèi)有害菌占優(yōu)勢(shì)時(shí)，人體免疫力就會(huì)下降；當(dāng)人體腸道腸道內(nèi)有益菌占優(yōu)勢(shì)時(shí)，人體免疫力就會(huì)得到改善。

鼠李糖乳桿菌是20世紀(jì)美國(guó)的兩位科學(xué)家從健康人體分離得到的，它能夠抵御消化道的不良環(huán)境，順利抵達(dá)腸道，在人體腸道內(nèi)高效定殖。它能夠吸附黃曲霉毒素，去除重金屬鎘。但是在鼠李糖乳桿菌抑菌與增強(qiáng)免疫力方面卻沒有相關(guān)報(bào)告。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種具有抑菌和增強(qiáng)免疫力功能的鼠李糖乳桿菌，以及該菌在制備藥物組合物、食品或保健品中的用途，從而彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明一個(gè)方面提供一種鼠李糖乳桿菌YJM-L01（Lactobacillus?rhamnosus?YJM-L01），已于2013年7月23日保存于中國(guó)武漢?武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC??NO:?M?2013355。

上述的鼠李糖乳桿菌用于制備菌粉制劑，是將鼠李糖乳桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)菌液通過凍干處理得到的。

本發(fā)明篩選的鼠李糖乳桿菌在制備抑菌和增強(qiáng)免疫力的生物制品中的應(yīng)用，所述的生物制品為藥品、食品或保健品。

本發(fā)明提供的鼠李糖乳桿菌具有很強(qiáng)的抑菌能力，且能顯著提高小鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、半數(shù)溶血值、巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)、NK細(xì)胞活性，增強(qiáng)正常小鼠的免疫力，因此可以廣泛應(yīng)用于藥品、食品或保健品中。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。對(duì)于實(shí)施例中所用到的具體方法或材料，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在本發(fā)明技術(shù)思路的基礎(chǔ)上，根據(jù)已有的技術(shù)進(jìn)行常規(guī)的替換選擇，而不僅限于本發(fā)明實(shí)施例的具體記載。

本發(fā)明實(shí)施例中選用的培養(yǎng)基配方如下：

MRS液體培養(yǎng)基：

蛋白胨?10.0?g；牛肉膏?10.0?g；酵母膏?5.0?g；檸檬酸氫二銨?2.0?g；葡萄糖20.0?g；吐溫80?1.0?mL；乙酸鈉?5.0?g；磷酸氫二鉀?2.0?g；硫酸鎂?0.58?g；硫酸錳0.25?g；蒸餾水?1?000?mL；pH?6.2-6.4?

添加碳酸鈣的MRS固體培養(yǎng)基：

蛋白胨?10.0?g；牛肉膏?10.0?g；酵母膏?5.0?g；檸檬酸氫二銨?2.0?g；葡萄糖20.0?g；吐溫80?1.0?mL；乙酸鈉?5.0?g；磷酸氫二鉀?2.0?g；硫酸鎂?0.58?g；硫酸錳0.25?g；瓊脂?18.0?g；碳酸鈣5g；蒸餾水?1?000?mL；pH?6.2-6.4?

碳酸鈣和瓊脂粉是調(diào)完pH再加，倒板之前搖勻。

實(shí)施例1鼠李糖乳桿菌的篩選與鑒定

采集健康成年人新鮮糞便中后段，以無菌玻璃棒將糞便搗碎，加入10倍重量PBS緩沖液，劇烈震蕩30min，2000g離心5min，收集上清液；將上清液5000g離心10min，收集沉淀；用PBS緩沖液反復(fù)洗滌沉淀2次；加少量PBS緩沖液充分懸浮沉淀；將懸浮液涂布于添加碳酸鈣的MRS選擇性培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)48h；挑選菌落大、生長(zhǎng)快的菌株，進(jìn)一步劃線純化。

將分離得到的一株菌命名為YJM-L01。菌落通圓形或類圓形，邊緣整齊，菌落大小一般為?2~3mm，乳白色。從下表所述生理生化鑒定結(jié)果初步鑒定該菌為鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus?rhamnosus）。

表1：YJM-?L01菌株生理生化特性鑒定結(jié)果

同時(shí)采用PCR擴(kuò)增該菌16S?rRNA序列，進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果顯示該序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中鼠李糖乳桿菌的同源性達(dá)99%，因此將該菌鑒定為鼠李糖乳桿菌，命名為鼠李糖乳桿菌YJM-L01（Lactobacillus?rhamnosus?YJM-L01），并于2013年7月23日保藏于中國(guó)武漢?武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M?2013355?。

實(shí)施例2?：篩選的鼠李糖乳桿菌YJM-L01耐酸、耐膽汁鹽實(shí)驗(yàn)