[發(fā)明專利]肉蓯蓉中雌激素活性成分的提取方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310334597.9
• 申請日: 2013-08-05
• 公開（公告）號: CN103405508A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李文蘭;丁晶鑫;丁振鐸;于淼;徐昶儒;白晶;張巖
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱商業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A61K36/64
• 分類號: A61K36/64;A23L1/29;A61P5/30;A61P9/00;A61P15/12;A61P35/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種雌激素活性成分的提取方法。

背景技術(shù)

植物雌激素(PE)是從天然植物中提取出來的一類化合物，由于其結(jié)構(gòu)與內(nèi)源性雌激素相似，故能夠與雌激素受體(ERs)結(jié)合，進而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，植物雌激素在眾多疾病預(yù)防及治療方面發(fā)揮作用，如心血管疾病、圍絕經(jīng)期綜合癥以及與雌激素相關(guān)的腫瘤等，近年來又被稱為“選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑”(SERMs)或中藥選擇性雌激素受體的調(diào)節(jié)劑。當(dāng)機體機能狀態(tài)失衡時，中藥既可使機體從亢進轉(zhuǎn)為正常，也可使機體從機能低下趨于正常，因機體所呈現(xiàn)病理狀態(tài)的不同而產(chǎn)生相反的藥理學(xué)作用，最終使機體達到平衡。

肉蓯蓉為列當(dāng)科植物肉蓯蓉Cistanche?deserticola?Y.C.Ma.或管花肉蓯蓉Cistanche?tubulosa(Schrenk)R.Wight的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖。肉蓯蓉味甘、咸，性溫，具有補腎陽、益精血、潤腸通便的功能。國內(nèi)外研究的焦點在于其抗衰老以及雌激素受體基因水平方面。現(xiàn)代藥理學(xué)表明，肉蓯蓉除作為傳統(tǒng)的補腎壯陽中藥外，還具有增強記憶、提高免疫力等其它功能。本發(fā)明方法從體內(nèi)和體外兩個角度出發(fā)，分別結(jié)合兩者的藥理學(xué)效應(yīng)對肉蓯蓉雌激素活性成分進行純化，為后續(xù)明確并且揭示肉蓯蓉中具有雌激素作用的活性成分奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種利用孔吸附樹脂提取肉蓯蓉中雌激素活性成分的方法。

本發(fā)明肉蓯蓉中雌激素活性成分的提取方法，按以下步驟進行：

一、將肉蓯蓉藥材粉碎，過4號篩，然后用10倍體積的乙醇溶液將肉蓯蓉藥材粉末浸泡過夜，于70°C加熱回流提取1h，收集提取液，得濾渣，所述乙醇溶液的體積濃度為95％；

二、然后向濾渣中加入6倍體積的乙醇溶液，于70℃加熱回流提取1h，收集提取液，所述乙醇溶液的體積濃度為95％；

三、重復(fù)步驟二1次，然后合并3次提取獲得的提取液，將提取液減壓濃縮干燥，得浸膏；

四、用蒸餾水將浸膏溶解，作為上樣樣品，加入預(yù)處理后的D101型大孔吸附樹脂中，使上樣樣品以2mL/min的流速通過D101型大孔吸附樹脂，然后以體積濃度為80％的乙醇溶液作為洗脫劑進行洗脫，pH值為7.0，洗脫量為20BV，洗脫速度為2BV/h，收集體積濃度為80％的乙醇洗脫液，即得到肉蓯蓉中雌激素活性成分。

步驟四所述D101型大孔吸附樹脂的預(yù)處理方法具體為：

a.丙酮處理：取D101型大孔吸附樹脂于燒杯中，加入丙酮浸泡24h，抽濾后放置在通風(fēng)處將丙酮揮干，得到干樹脂；

b.乙醇處理：將步驟a得到的干樹脂放入燒杯中，加入無水乙醇至液面高于樹脂2cm，浸泡樹脂過程中用玻璃棒攪拌，每3～4小時更換乙醇，直至洗出液與水(1∶5)無混濁停止，然后用蒸餾水洗凈樹脂上殘留乙醇；

c.酸堿處理：向?qū)游鲋屑尤塍w積濃度為5％的鹽酸溶液，使液面高于樹脂2cm，浸泡4h，用蒸餾水洗至洗液的pH值為中性，繼續(xù)樹脂中加入體積濃度為5％氫氧化鈉溶液，液面高于樹脂2cm，浸泡4h，最后用蒸餾水淋洗，直至洗液pH為中性，即完成D101型大孔吸附樹脂的預(yù)處理。

D101型大孔吸附樹脂的裝柱及再生方法具體為：

a.裝柱：采用乙醇濕法裝柱，將樹脂裝入吸附柱中，并保持95％乙醇面高出樹脂面約10mm，浸泡平衡12h。用95％乙醇洗滌樹脂層，直至流出液加兩倍蒸餾水不呈白色渾濁，用蒸餾水繼續(xù)洗至無醇味即可。

b.再生：用95％乙醇洗滌用過的樹脂，直到洗脫液近無色，用蒸餾水洗滌樹脂層至無醇味，必要時用1～2倍樹脂體積的4％NaOH溶液洗滌樹脂層，用蒸餾水洗至中性，備用。

為進一步純化肉蓯蓉擬雌激素的活性成分，采用大孔吸附樹脂技術(shù)對其成分進行富集純化。大孔吸附樹脂是一類不含交換基團，且具有大孔結(jié)構(gòu)的有機高聚物吸附劑，它能從中藥中選擇性地吸附所需的有效成分，現(xiàn)如今被廣泛應(yīng)用于有效成分及有效部位的分離純化。本發(fā)明的目的是為了考察肉蓯蓉雌激素樣有效成分在D-101型大孔吸附樹脂上的最佳吸附條件以及解吸附條件，以篩選出大孔吸附樹脂純化肉蓯蓉雌激素樣活性成分的工藝參數(shù)，為其更深一步研究奠定了基礎(chǔ)。

通過本發(fā)明所述的方法獲得的活性成分能顯著增大小鼠的子宮系數(shù)，能顯著提高MCF-7(人乳腺癌細胞)細胞增殖作用，具有顯著的雌激素活性作用，并結(jié)合動物模型實驗證實具有擬雌激素活性的作用；該有效部位可應(yīng)用于在制備調(diào)節(jié)體內(nèi)植物雌激素水平的藥物、藥物組合物的應(yīng)用及制備功能食品的應(yīng)用。