[發明專利]麻保沙星快速檢測試紙卡及制備方法

有效

• 申請號: 201310334328.2
• 申請日: 2013-08-03
• 公開（公告）號: CN103439505A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 張改平;孫亞寧;王方雨;滕蔓;李青梅;楊繼飛;柴書軍
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/566
• 代理公司: 鄭州金成知識產權事務所(普通合伙) 41121
• 代理人: 郭增欣

技術領域

本發明涉及一種快速檢測麻保沙星的器具，特別是涉及一種快速檢測麻保沙星的試紙卡及制備方法。

技術背景

麻保沙星為氟喹諾酮類抗生素，具有抗菌普廣、殺菌活性強、體內分布廣泛等特點，并且與其他抗菌藥物無交叉耐藥性。目前，該抗生素廣泛應用于畜禽和水產養殖中。麻保沙星作為用于食品類動物中的藥物，其在動物可食性組織和產品中的殘留致癌毒性備受關注。國家對其在不同肉品中最高殘留量做了嚴格規定。因麻保沙星價格低廉，抗菌普廣、殺菌活性強，養殖戶盲目追求預防和治療效果，人為超量添加，造成在肉品中殘留超標的現象普遍存在。因此,精確檢測肉品中麻保沙星殘留量非常重要。

目前，測定麻保沙星的方法多為高效液相色譜法、液相色譜-質譜聯用、毛細管區帶電泳與質譜聯用等法。這些方法檢測時間一般較長，檢測成本高，對檢測人員素質要求高，嚴重制約了在實際檢測中的應用，難以推廣。由于這些方法的局限性和嚴重滯后性，使監控麻保沙星的非法使用變得困難，無法保證食品安全監控的有效性。

發明內容

本發明要解決的技術問題：提供一種特異強、靈敏度高，能快速、簡便地檢測麻保沙星的試紙卡及制備方法。

本發明的技術方案是：

一種麻保沙星快速檢測試紙卡，含有外殼和位于外殼內的試紙芯，試紙芯包括底板，底板上依次固定黏貼有樣品墊、膠體金標記墊、檢測反應區和吸水墊，所述膠體金標記墊吸附有麻保沙星的特異性抗體，所述檢測反應區設有麻保沙星偶聯載體蛋白溶液印制的隱形檢測印跡，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隱形對照印跡；所述麻保沙星特異性抗體為膠體金標記的麻保沙星單克隆抗體或多克隆抗體。

所述麻保沙星偶聯載體蛋白溶液是由以下方法制備的：

稱取2?mg?麻保沙星溶解于500?μL?的DMF溶劑中，加入2?mg?NHS和2?mg?EDC，室溫避光反應24h，得到活化的麻保沙星液；稱取載體蛋白2?mg，充分溶解于2?ml?0.13?的mol/L?的PBS溶液中，將活化的麻保沙星液逐滴加入載體蛋白溶液中，密封避光于室溫下攪拌4h；將反應產物置于4℃層析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，離心除去沉淀，得到麻保沙星載體蛋白的偶聯物，分裝，-20℃保存，備用。

所述麻保沙星偶聯載體蛋白為甲狀腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血藍蛋白。

所述底板由硬質塑膠條或不吸水的硬紙條制成；所述樣品墊用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水墊用吸水濾紙或濾油紙制成；所述檢測反應區用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜制成；所述膠體金標記墊用玻璃纖維、聚酯膜、醋酸纖維或尼龍膜制成。

所述外殼由底座和面板構成，底座和面板通過嵌合連在一起，底座上設有放置試紙芯的凹槽，面板上設有檢測窗、加樣孔，檢測窗與試紙芯的檢測反應區相對應，加樣孔與試紙芯的樣品墊相對應。

所述隱形檢測印跡和隱形對照印跡的排列方式為“︱︱”、“＋＋”或“··”。

所述麻保沙星快速檢測試紙卡的制備方法，包括以下步驟：?

（1）麻保沙星與載體蛋白的偶聯：

稱取2?mg?麻保沙星溶解于500?μL?的DMF溶劑中，加入2?mg?NHS和2?mg?EDC，室溫避光反應24h，得到活化的麻保沙星液；稱取載體蛋白2?mg，充分溶解于2?ml?0.13?的mol/L?的PBS溶液中，將活化的麻保沙星液逐滴加入載體蛋白溶液中，密封避光于室溫下攪拌4h；將反應產物置于4℃層析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，離心除去沉淀，得到麻保沙星載體蛋白的偶聯物，分裝，-20℃保存，備用；

（2）抗麻保沙星特異性抗體的制備；

（3）麻保沙星特異性抗體的制備；