[發明專利]一種酶法結合膜技術一步制備精品肝素鈉的方法有效

申請號：	201310333091.6	申請日：	2013-08-02
公開（公告）號：	CN104341539B	公開（公告）日：	2016-10-26
發明（設計）人：	萬端極;吳正奇;徐國念;海文英;李猷;王雄;司佳;馬超;廖宇杰;楊濤;萬瑩	申請（專利權）人：	武漢普賽特膜技術循環利用有限公司
主分類號：	C08B37/10	分類號：	C08B37/10
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種結合膜技術一步制備精品肝素鈉方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種對豬小腸粘膜進行精深加工的方法，主要涉及一種以豬小腸粘膜為原料，利用生物技術制備精品肝素鈉的方法。本發明采用生物酶法與膜分離技術相結合，一步制備高質量的精品肝素鈉，避開傳統工藝先制備粗品，再以粗品為原料制備精品的繁瑣工藝。

背景技術

我國豬小腸資源豐富，腸粘膜又是生產腸衣的廢棄物，而肝素含量甚高，所以我國主要從豬小腸粘膜中提取肝素鈉。

肝素廣泛存在于哺乳動物的各種器官組織中，是一類由結締組織的肥大細胞產生的粘多糖物質。在自然界中廣泛分布在豬、牛、狗等哺乳動物的內臟和腸粘膜中。肝素主要是由D-葡糖胺，L-艾杜糖醛酸，N-乙酰葡萄糖胺及D-葡糖醛酸交替組成的粘多糖硫酸酯，分子量分布在6000～20000。為白色或類白色粉末，無毒無味，有吸濕性。肝素通常以鈉鹽的形式存在，稱為肝素鈉（Heparin?Sodium）或肝素鈣，在使用中尤以肝素鈉為主。肝素及其鈉鹽易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六環等有機溶劑，分子結構單元中含有5個硫酸基和2個羥基，呈強酸性，為聚陰離子，能與陽離子發生反應生成鹽。游離酸在乙醚中有一定的溶解度。肝素鈉是肝素以鈉鹽的形式被提取出來，并制成藥用制劑。實際上產生藥效的是肝素，肝素具有抗凝血作用，是一種應用已久的抗凝血劑。把肝素制成合適的鈉鹽能便于他的保存，制劑和使用，使其不至于在一定時期內失去活性和藥效。

研究肝素鈉提取工藝基于以下幾點：第一，肝素首先從新鮮的健康生豬的小腸粘膜中提取并制成肝素粗品，肝素粗品中含有病毒及蛋白質，不能直接應用于臨床治療，需進一步提純以制成肝素原料藥，而在我國肝素鈉行業，精品制作只掌握在少數一兩家企業手中，大部分是以家庭式的作坊為主制作粗品肝素鈉，這種方法制得的肝素鈉效價低，并且生產過程產生的廢水氣味難聞，污染大。第二，肝素鈉作為一種抗凝血的藥物，由于其利潤十分的可觀，近年來同行業的競爭越來越大。生產精品肝素的專利年限即將到期，而同時仿制藥已經在美國上市，出口價必將下降；第三，肝素鈉行業產品利潤分配極其不均勻，肝素鈉的精品和粗品價格相差甚遠，精品大多由國外生產，國內精品的生產技術只掌握在如海普瑞等少數廠家手中。而肝素鈉的粗品市場很混亂，主要以作坊式的生產方式為主，品質和來源的穩定性不好控制。

發明內容

為了克服現有工藝的問題和缺陷，充分利用動物內臟資源，本發明提供一種從豬小腸粘膜中提取肝素鈉的方法。以豬小腸粘膜為原料，采用生物提取技術及膜分離技術生產肝素鈉。

本發明的目的可以通過下述技術方案來實現：

1、一種酶法結合膜技術一步制備精品肝素鈉的方法，其特征在于按以下步驟進行：

a、將新鮮的豬小腸粘膜按其比重加入0.5倍的水，調節pH為7.0~7.5，置于98℃的水浴鍋中，待料液溫度上升到95℃時保溫30min；

b、將a步驟得到的料液快速降溫至50℃左右，調節pH為10.0左右，置于50℃的水浴鍋中堿提攪拌2h；

c、將b步驟中得到的堿提液加入水解蛋白復合酶，在溫度為55℃的水浴鍋中攪拌酶解2h；

d、將c步驟中的酶解液冷卻至室溫，調節pH為6.5，靜置3h以上，離心，得到沉淀和清液；

e、將d步驟中清液升溫至30℃，經過壓力為0.2～0.25MPa，溫度為40～50℃，流量為90L/min條件下的微濾膜進行除雜，得到微濾膜濾液；

f、將e步驟中的透過液經過壓力為1.5～2MPa，溫度為40～50℃，流量為20L/min的納濾膜進行濃縮，得到納濾膜濃縮液，濃縮液即為除去大部分雜質的肝素鈉溶液；

g、將f步驟中得到的濃縮液調節pH為10.0左右，加入20%的乙醇攪拌，靜置6h以上，然后過濾，收集濾液。

h、將g步驟中的濾液調節pH為6.5，補加濃縮液130%的乙醇，攪拌，靜置2h，虹吸出上層清液，沉淀烘干即得產品肝素鈉。