[發(fā)明專利]水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境沉積物中孔雀石綠及其代謝物含量檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310332289.2
• 申請(qǐng)日: 2013-08-01
• 公開（公告）號(hào): CN103399096A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梅光明;張小軍;郭遠(yuǎn)明;嚴(yán)忠雍;李佩佩;何依娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省海洋水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.?水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境沉積物中孔雀石綠及其代謝物含量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括超聲溶劑萃取、固相萃取富集凈化和液相色譜—質(zhì)譜檢測(cè)這三個(gè)步驟，其中：

所述的超聲溶劑萃取，按下面步驟操作：準(zhǔn)確稱量2.0～10.0g均勻沉積物樣品加入到聚丙烯離心管中，準(zhǔn)確加入50ng氘代孔雀石綠、50ng氘代隱色孔雀石綠和10～12mL色譜純乙腈；加塞后渦旋振蕩混勻2min，在40KHz超聲波作用下35～45℃溫度萃取8min，然后將萃取樣品在轉(zhuǎn)速5000?rpm下離心6?min，上清液轉(zhuǎn)移至25mL比色管中；殘?jiān)性偌尤?2mL乙腈后重復(fù)前面的提取和離心操作一次，合并上清液并用乙腈定容至25mL，即得到樣品液；

所述的固相萃取富集凈化，按下面步驟操作：在3mL聚乙烯固相萃取小柱底部先放置一層孔徑20μm石英砂濾芯篩板，加入20～60mg多壁碳納米管材料，上面再放置一層20μm濾芯篩板，通過調(diào)節(jié)上層濾芯篩板向下壓緊程度來控制多壁碳納米管填料厚度在0.5～0.6cm；制作完成的多壁碳納米管固相萃取柱先用5mL甲醇和5mL純水潤(rùn)洗活化，棄去流出液；然后準(zhǔn)確移取5mL樣品液到固相萃取柱中，控制流速在1.0mL/min，接收流出液；再向固相萃取柱中加入5%甲酸乙腈2～4mL進(jìn)行淋洗，合并流出液；

所述的液相色譜—質(zhì)譜檢測(cè)，按下面步驟操作：流出液經(jīng)45～55℃下氮?dú)獯蹈珊螅?mL初始組成流動(dòng)相充分溶解；取1mL樣液，經(jīng)0.22μm有機(jī)相微孔濾膜過濾到樣品小瓶中，在已設(shè)定的液相色譜—質(zhì)譜條件下進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)行定性定量分析；

色譜條件：C₁₈色譜柱柱溫40℃，進(jìn)樣量10μL，流動(dòng)相組成為用甲酸調(diào)pH至4.5的5mmol/L乙酸銨緩沖溶液和乙腈，流速0.3?mL/min；

梯度洗脫條件：0～3.0min內(nèi)乙酸銨緩沖溶液體積濃度由50%線性降至5%；3.0～5.0min內(nèi)乙酸銨緩沖溶液體積濃度由5%線性升至50%；

質(zhì)譜條件：電噴霧正離子模式，毛細(xì)管電壓3.50?kv，離子源溫度120℃，脫溶劑氣溫度380℃，脫溶劑氣流量600?L/h，錐孔氣流量50?L/h，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式；孔雀石綠定量離子對(duì)329.3/313.2,?定性離子對(duì)329.3/208.1，隱色孔雀石綠定量離子對(duì)331.2/316.2,?定性離子對(duì)331.2/239.2；繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，以內(nèi)標(biāo)法定量計(jì)算孔雀石綠和隱色孔雀石綠含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境沉積物中孔雀石綠含量的檢測(cè)方法，其特征在于：所述的多壁碳納米管材料直徑為40～60nm，長(zhǎng)度為5～15μm，純度＞95%，灰分≤2%，比表面積為40～300m²/g。