[發(fā)明專利]一種從發(fā)酵液中分離純化1403B的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310330026.8
• 申請日: 2013-07-31
• 公開（公告）號: CN103435457A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 那可;趙文杰;趙波;劉永雙;魏曉東;馬川川;張守雨
• 申請（專利權(quán)）人: 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院
• 主分類號: C07C46/10
• 分類號: C07C46/10;C07C50/34
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 張睿

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及發(fā)酵液的分離純化，尤其涉及一種從發(fā)酵液中分離純化1403B的方法。

背景技術(shù)

1403B是從海洋紅樹林內(nèi)生真菌Halorosenia?sp.1403（CCTCC?NO.201018）的發(fā)酵液中分離得到的蒽醌類天然產(chǎn)物。經(jīng)活性測試發(fā)現(xiàn)其具有較好的抗結(jié)核菌活性（佘志剛，林永成等.醌類化合物在制備抗結(jié)核菌藥物中的應(yīng)用.ZL201010204766.3），該化合物能用于開發(fā)抗結(jié)核藥物，應(yīng)用前景廣闊。

目前已報道的分離純化方法主要為萃取--硅膠、聚酰胺層析--重結(jié)晶的方法，如專利ZL201010204766.3報道：將發(fā)酵液固液分離后除去菌體，上清液加熱濃縮至原體積的1/20-1/5，用乙酸乙酯反復(fù)萃取、濃縮，濃縮物在硅膠柱中進行層析分離，用石油醚/乙酸乙酯/甲醇梯度洗脫，收集30%--80%乙酸乙酯/石油醚部分，濃縮后再經(jīng)聚酰胺柱層析，45%乙酸乙酯/石油醚洗脫，重結(jié)晶純化，得到紅色顆粒狀1403B晶體。

文獻報道的分離純化方法存在一些缺點：操作較為繁瑣；有機溶劑用量大、揮發(fā)性強、毒性較大、對環(huán)境有污染且安全性差；所用層析介質(zhì)易污染、重復(fù)使用次數(shù)少等。上述缺點不利于1403B的規(guī)模化制備。

因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種從紅樹林內(nèi)生真菌Halorosenia?sp.1403（CCTCC?NO.201018）的發(fā)酵液中分離純化天然產(chǎn)物1403B的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種從發(fā)酵液中分離純化1403B的方法。

本發(fā)明提供了一種從發(fā)酵液中分離純化1403B的方法，所述方法包括步驟：

（1）將1403B的發(fā)酵液和有機溶劑或其水溶液混合、抽提，得到抽提液；

（2）使抽提液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附，用有機溶劑或其水溶液解吸，得到解吸液；和

（3）使解吸液經(jīng)大孔聚合物填料層析，用有機溶劑或其水溶液洗脫，得到1403B餾分。

在另一優(yōu)選例中，所述大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，所述大孔聚合物填料為非極性大孔聚合物填料；

較佳地，所述非極性大孔吸附樹脂骨架選自苯乙烯-二乙烯苯或甲基丙烯酸脂；更佳地為苯乙烯-二乙烯苯；

較佳地所述的非極性聚合物填料的骨架選自苯乙烯-二乙烯苯或甲基丙烯酸脂；更佳地為苯乙烯-二乙烯苯。

在另一優(yōu)選例中，所述大孔聚合物填料粒徑為4-100μm；更優(yōu)選4-30μm。

在另一優(yōu)選例中，步驟（2）中所述有機溶劑或其水溶液的pH為10.0-13.0；更優(yōu)選pH12.5-13.0。

在另一優(yōu)選例中，步驟（3）中使pH為2.0-5.0的解吸液經(jīng)大孔聚合物填料吸附；更優(yōu)選pH2.0-4.0。

在另一優(yōu)選例中，所述有機溶劑選自醇類、酮類或腈類；更優(yōu)選醇類；最優(yōu)選C1-C4醇。

在另一優(yōu)選例中，步驟（1）中將1403B的發(fā)酵液和有機溶劑或其水溶液混合后，所述有機溶劑在混合物中的體積比為20%-90%（更優(yōu)選30%-90%），并且混合液的pH為1.0-4.0（更優(yōu)選pH1.0-2.5）。

在另一優(yōu)選例中，步驟（1）中在室溫-80℃進行抽提；更優(yōu)選70-80℃。

在另一優(yōu)選例中，步驟（2）中用于解吸的有機溶劑水溶液中有機溶劑的體積比為30%-75%；更優(yōu)選30%-55%。

在另一優(yōu)選例中，步驟（3）中用于洗脫的有機溶劑水溶液中有機溶劑的體積比為30%-75%。

在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括步驟：將1403B餾分濃縮、析晶，得到1403B晶體。

據(jù)此，本發(fā)明提供了一種從紅樹林內(nèi)生真菌Halorosenia?sp.1403（CCTCC?NO.201018）的發(fā)酵液中分離純化天然產(chǎn)物1403B的方法。

附圖說明

圖1顯示了實施例1分離純化得到的1403B的質(zhì)譜測定結(jié)果。

具體實施方式

發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，驚奇地發(fā)現(xiàn)將1403B發(fā)酵液經(jīng)過有機溶劑抽提、大孔吸附樹脂的富集、大孔聚合物填料層析和結(jié)晶，可以得到高純度的1403B。

如本文所用，“1403B”是指分子式為C₁₆H₁₆O₇的物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)式為：