[發(fā)明專利]細(xì)胞致死腫脹毒素及以其為目標(biāo)的彎曲桿菌屬細(xì)菌的檢測

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310328897.6
• 申請日: 2004-12-03
• 公開（公告）號: CN103397041A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 山崎伸二;朝倉昌博
• 申請（專利權(quán)）人: 扶桑藥品工業(yè)株式會社
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12P21/02;C07K14/205;C07K16/12
• 代理公司: 北京三幸商標(biāo)專利事務(wù)所 11216
• 代理人: 劉激揚

本發(fā)明是2004年12月03日申請的發(fā)明名稱為“細(xì)胞致死腫脹毒素及以其為目標(biāo)的彎曲桿菌屬細(xì)菌的檢測”的第200480041257.6號和第201210085750.4號發(fā)明專利申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及大腸彎曲桿菌(Campylobacter?coli)的細(xì)胞致死腫脹毒素及其編碼多核苷酸。本發(fā)明還涉及通過追蹤彎曲桿菌(包括大腸彎曲桿菌)的細(xì)胞致死腫脹毒素，以檢測待測樣品中(如臨床樣品和食物)存在彎曲桿菌的方法。

背景技術(shù)

彎曲桿菌是對人類和野生動物以及家畜具有致病性的微生物，它會引起動物的流產(chǎn)和腸炎和人類的腸炎。空腸彎曲桿菌(Campylobacter?jejuni)和大腸彎曲桿菌是已知的人體內(nèi)引起彎曲桿菌感染的病原菌。這些細(xì)菌經(jīng)常被稱為食物中毒細(xì)菌(參見非專利文件1和2)。

到2000年，彎曲桿菌已被分為15個種和9個亞種。空腸彎曲桿菌在人腹瀉病例中分離的細(xì)菌中占95－99%，而其它細(xì)菌品種，如大腸彎曲桿菌僅占很少的百分比(參見非專利文件3)。然而，豬中大腸彎曲桿菌的攜帶率非常地高。近年來，隨著主要由東南亞進(jìn)口豬肉的增加，彎曲桿菌感染已經(jīng)呈現(xiàn)增長趨勢。特別地，由于牛肉如BSE和O-157問題導(dǎo)致與雞肉相關(guān)食品消費的增長，雞肉相關(guān)食品的感染迅速增加了。

此外，雖然胚胎彎曲桿菌是公知引起綿羊和牛流產(chǎn)的細(xì)菌，但是只到最近才報道它同樣涉及人的流產(chǎn)和早產(chǎn)。由于吃了胚胎彎曲桿菌污染的生的肝臟或者牛肉而感染胚胎彎曲桿菌會出現(xiàn)如膿血癥和腦膜炎的癥狀。人類胚胎彎曲桿菌感染的主要來源是雞肉，其腸道內(nèi)高密度帶菌(參見非專利文件4)。

彎曲桿菌一般高密度分布在動物，如牛、羊、豬和雞的消化道內(nèi)，因而被稱為人獸互通病病原菌。大多數(shù)彎曲桿菌病認(rèn)為是由雞肉造成。感染會通過直接接觸上述動物或其糞便引起，或者通過攝入或加工被糞便污染的食物、飲用水、牛奶引起。此外，在如新生兒監(jiān)護(hù)室的環(huán)境中，也有感染病例的報道(參見非專利文件5)。

彎曲桿菌病有一個3至7天的長潛伏期。其特征表現(xiàn)為胃腸炎癥狀，如腹瀉(有時為出血的粘液性腹瀉)、腹痛、發(fā)燒、反胃、嘔吐、頭痛、畏寒和虛弱。雖然致死率低，但是新生兒可能發(fā)展成全身感染，如膿血癥和腦膜炎。在大多數(shù)情況下，治愈需要幾天至約一周的時間。除了一些免疫缺陷病人，一般預(yù)測會有一個有利的治療過程。然而，近些年已經(jīng)報道，病人感染彎曲桿菌病后可能引起吉蘭－巴雷綜合癥(Guillain-Barre)或者Fischer綜合癥，它們屬于自身免疫病。由彎曲桿菌病引發(fā)的病例通常傾向變得嚴(yán)重，而且發(fā)作的一年后痊愈率只有60%。

對狀況嚴(yán)重或者伴有膿血癥的病例，使用抗生素化學(xué)療法。首選的藥物是大環(huán)內(nèi)酯物，如紅霉素。由于天然抗性，cephem類抗生素預(yù)計沒有治療效果。同時，對新的喹諾酮抗生素有抗性的細(xì)菌數(shù)量的增長已成為近年來的問題。感染后病原體微生物的快速鑒定對實施正確的彎曲桿菌病治療方案以及發(fā)現(xiàn)感染途徑以阻止感染的擴散有重要意義。然而，僅依據(jù)臨床癥狀難以診斷彎曲桿菌病，更不用說鑒定彎曲桿菌及其種類。

彎曲桿菌是微需氧生物。該細(xì)菌的培養(yǎng)需要如Skirrow氏培養(yǎng)基的特殊培養(yǎng)基和特殊儀器(厭氧廣口瓶或其類似物)以維持氧氣的濃度在3－10%的絕對微需氧條件。此外，與其它微生物相比，該培養(yǎng)過程是耗時的(2－3天)。因此，難以獲得和維持彎曲桿菌的隔離培養(yǎng)。另外，由于彎曲桿菌在空氣中易死亡，因此它們必須在樣品收集后2－3小時內(nèi)檢測。而且由于彎曲桿菌病的潛伏時間長(3－7天)，出現(xiàn)病癥后，在對相關(guān)食物的細(xì)菌鑒定的時候，通常不能分離到該細(xì)菌。還有，彎曲桿菌有非常強的傳染性，據(jù)報道只要幾百個細(xì)胞就會造成傳染。因而，對傳染源的鑒定是極度困難的。

區(qū)別診斷空腸彎曲桿菌和大腸彎曲桿菌的一種方法涉及檢測馬尿酸鹽的水解。具體地，該方法是以空腸彎曲桿菌能夠水解馬尿酸鹽，而大腸彎曲桿菌不能水解馬尿酸鹽的事實為基礎(chǔ)。然而，該方法不精確，因為現(xiàn)有技術(shù)中已知存在一些馬尿酸鹽陰性的空腸彎曲桿菌(參見非專利文件6)。因此，只有通過從食物攝取的歷史記錄和癥狀估計細(xì)菌的存在，以及通過檢測由糞便培養(yǎng)物中得到菌落的細(xì)菌的形態(tài)和生物特征，這需要數(shù)天時間，才能證實彎曲桿菌的存在。