[發(fā)明專(zhuān)利]上皮細(xì)胞粘附分子的核酸適體EpCAM B及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310328301.2
• 申請(qǐng)日: 2012-09-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103387990A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊朝勇;宋彥齡;安源;鄒遠(yuǎn);張薇婷;鄔杰;莊峙廈
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廈門(mén)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/115
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/115;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 廈門(mén)南強(qiáng)之路專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種核酸，特別涉及EpCAM(Epithelial?cell?adhesion?molecule)上皮細(xì)胞粘附分子的核酸適體制備方法及其在腫瘤早期檢測(cè)、治療和預(yù)后中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

EpCAM(Epithelial?cell?adhesion?molecule)上皮細(xì)胞粘附分子屬于黏附分子家族，也稱(chēng)為17-A，ESA，EGP40，Trop-1，KSA,CD326，TACSTD1，CO17-1A，GA733-2等。EpCAM是一種由腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)1(tumor-associated?calcium?signal?transducer1,TACSTD1)基因編碼的一個(gè)分子量30-40kDa的單次跨膜蛋白，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附、介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞遷移、增殖和分化等功能（1、Kurtz?JE，Dufour?P.Adecatumumab:an?anti-EpCAM?monoclonal?antibody，from?the?bench?to?the?bedside［J］.Expert?Opin?BiolTher，2010，10(6):951-958；2、Trzpis?M，McLaughlin?PM,de?Leij?LM，et?al．Epithelial?cell?adhesion?molecule.More?than?a?carcinoma?marker?and?adhesion?molecule［J］．Am?J?Pathol,2007，171(2):386-395）。?

EpCAM表達(dá)在人部分正常上皮細(xì)胞和大多數(shù)惡性上皮細(xì)胞表面，目前普遍認(rèn)為它對(duì)腫瘤的生物學(xué)特性起重要作用。病理情況下，EpCAM幾乎表達(dá)于所有的腺癌中，包括結(jié)直腸腺癌、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、前列腺癌、胰腺癌以及肝細(xì)胞癌和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（1、Kurtz?JE，Dufour?P.Adecatumumab:an?anti-EpCAM?monoclonal?antibody，from?the?bench?to?the?bedside［J］.Expert?Opin?BiolTher，2010，10(6):951-958）。研究發(fā)現(xiàn)EpCAM也是一些腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)記物，Kimura等的研究發(fā)現(xiàn)EpCAM陽(yáng)性的肝癌干細(xì)胞能夠誘導(dǎo)免疫缺陷的小鼠發(fā)生腫瘤（3、Kimura?O，Takahashi?T，Ishii?N，et?al．Characterization?of?theepithelial?cell?adhesion?molecule(EpCAM)+cell?population?in?hepatocellular?carcinoma?cell?lines?［J］．Cancer?Sci，2010，101(10):2145-2155．）。將肝細(xì)胞癌EpCAM陽(yáng)性及陰性亞群細(xì)胞分別注射到免疫缺陷的小鼠體內(nèi)，結(jié)果顯示形成腫瘤所需的癌細(xì)胞數(shù)EpCAM陽(yáng)性者遠(yuǎn)少于EpCAM陰性者，且注射EpCAM陽(yáng)性癌細(xì)胞的小鼠所產(chǎn)生的腫瘤比注射EpCAM陰性者更大，說(shuō)明EpCAM陽(yáng)性的癌細(xì)胞致瘤性比EpCAM陰性的癌細(xì)胞大。肝細(xì)胞癌細(xì)胞系中EpCAM陽(yáng)性的亞群克隆速率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于EpCAM陰性的亞群。研究還發(fā)現(xiàn)，EpCAM陽(yáng)性的癌?細(xì)胞可以分化為EpCAM陽(yáng)性和陰性的細(xì)胞，而EpCAM陰性的癌細(xì)胞只能分化為EpCAM陰性的細(xì)胞，說(shuō)明EpCAM陽(yáng)性的癌細(xì)胞具有多項(xiàng)分化的潛能。?

腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移是其死亡率居高不下的主要原因，循環(huán)血腫瘤細(xì)胞則是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的根源。及時(shí)發(fā)現(xiàn)循環(huán)血中腫瘤細(xì)胞，可以預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，提高患者生存率，改善預(yù)后。EpCAM抗體與芯片技術(shù)結(jié)合用于分離腫瘤患者外周血中的腫瘤細(xì)胞，結(jié)果在99．1％(115／116)的血樣品中成功分離出數(shù)量不等的腫瘤細(xì)胞(其中包括所有7例早期前列腺癌患者)；而且循環(huán)血腫瘤細(xì)胞數(shù)的改變與影像學(xué)檢查的疾病進(jìn)程高度關(guān)聯(lián)（4、Nagratb?S，Sequist?LV，Mabeswaran?S，et?a1．Isolation?of?rare?circulating?tumour?cells?in?cancer?patients?by?microchip?technology．Nature，2007，450(7173)：1235—1239）。但是，抗體由于分子量較大、位阻大、難儲(chǔ)存易降解等缺點(diǎn)，很大程度抑制了循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)。?