[發明專利]上皮細胞粘附分子的核酸適體EpCAM C及其制備方法

有效

• 申請號: 201310328257.5
• 申請日: 2012-09-24
• 公開（公告）號: CN103409427A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 楊朝勇;宋彥齡;安源;鄒遠;張薇婷;鄔杰;莊峙廈
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種核酸，特別涉及EpCAM(Epithelial?cell?adhesion?molecule)上皮細胞粘附分子的核酸適體制備方法及其在腫瘤早期檢測、治療和預后中的應用。?

背景技術

EpCAM(Epithelial?cell?adhesion?molecule)上皮細胞粘附分子屬于黏附分子家族，也稱為17-A，ESA，EGP40，Trop-1，KSA,CD326，TACSTD1，CO17-1A，GA733-2等。EpCAM是一種由腫瘤相關鈣信號轉導1(tumor-associated?calcium?signal?transducer1,TACSTD1)基因編碼的一個分子量30-40kDa的單次跨膜蛋白，參與調節細胞粘附、介導信號轉導、細胞遷移、增殖和分化等功能（1、Kurtz?JE，Dufour?P.Adecatumumab:an?anti-EpCAM?monoclonal?antibody，from?the?bench?to?the?bedside［J］.Expert?Opin?BiolTher，2010，10(6):951-958；2、Trzpis?M，McLaughlin?PM,de?Leij?LM，et?al．Epithelial?cell?adhesion?molecule.More?than?a?carcinoma?marker?and?adhesion?molecule［J］．Am?J?Pathol,2007，171(2):386-395）。?

EpCAM表達在人部分正常上皮細胞和大多數惡性上皮細胞表面，目前普遍認為它對腫瘤的生物學特性起重要作用。病理情況下，EpCAM幾乎表達于所有的腺癌中，包括結直腸腺癌、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、前列腺癌、胰腺癌以及肝細胞癌和視網膜母細胞瘤（1、Kurtz?JE，Dufour?P.Adecatumumab:an?anti-EpCAM?monoclonal?antibody，from?the?bench?to?the?bedside［J］.Expert?Opin?BiolTher，2010，10(6):951-958）。研究發現EpCAM也是一些腫瘤干細胞的標記物，Kimura等的研究發現EpCAM陽性的肝癌干細胞能夠誘導免疫缺陷的小鼠發生腫瘤（3、Kimura?O，Takahashi?T，Ishii?N，et?al．Characterization?of?theepithelial?cell?adhesion?molecule(EpCAM)+cell?population?in?hepatocellular?carcinoma?cell?lines［J］．Cancer?Sci，2010，101(10):2145-2155．）。將肝細胞癌EpCAM陽性及陰性亞群細胞分別注射到免疫缺陷的小鼠體內，結果顯示形成腫瘤所需的癌細胞數EpCAM陽性者遠少于EpCAM陰性者，且注射EpCAM陽性癌細胞的小鼠所產生的腫瘤比注射EpCAM陰性者更大，說明EpCAM陽性的癌細胞致瘤性比EpCAM陰性的癌細胞大。肝細胞癌細胞系中EpCAM陽性的亞群克隆速率遠遠大于EpCAM陰性的亞群。研究還發現，EpCAM陽性的癌?細胞可以分化為EpCAM陽性和陰性的細胞，而EpCAM陰性的癌細胞只能分化為EpCAM陰性的細胞，說明EpCAM陽性的癌細胞具有多項分化的潛能。?

腫瘤的復發、轉移是其死亡率居高不下的主要原因，循環血腫瘤細胞則是腫瘤復發、轉移的根源。及時發現循環血中腫瘤細胞，可以預防腫瘤復發和轉移，提高患者生存率，改善預后。EpCAM抗體與芯片技術結合用于分離腫瘤患者外周血中的腫瘤細胞，結果在99．1％(115／116)的血樣品中成功分離出數量不等的腫瘤細胞(其中包括所有7例早期前列腺癌患者)；而且循環血腫瘤細胞數的改變與影像學檢查的疾病進程高度關聯（4、Nagratb?S，Sequist?LV，Mabeswaran?S，et?a1．Isolation?of?rare?circulating?tumour?cells?in?cancer?patients?by?microchip?technology．Nature，2007，450(7173)：1235—1239）。但是，抗體由于分子量較大、位阻大、難儲存易降解等缺點，很大程度抑制了循環腫瘤細胞的檢測。?