[發明專利]基于γ-Fe2O3納米粒子間接富集免疫磁分離的致病菌檢測方法

無效

• 申請號: 201310326609.3
• 申請日: 2013-07-31
• 公開（公告）號: CN103424371A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 張錦勝;唐群;賴衛華
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

1.一種基于γ-Fe₂O₃納米粒子間接富集免疫磁分離的致病菌檢測方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：

1）將檢測目標菌與目標菌的第1抗體結合形成1抗復合物；

2）檢測目標菌的1抗抗體，即2抗特異性免疫磁珠的制備；目標菌先與1抗結合形成復合物，用2抗特異性免疫磁珠富集、分離，1抗起信號放大作用；在本方法中，特異性免疫磁珠采用納米材料制備，即是富集分離的手段，也是信號放大的載體，因此，在此也稱為納米探針；

3）將目標菌1抗特異性單克隆抗體在固相載體上的固定；

4）免疫磁珠富集目標菌株，并分離：將第2步制得的2抗免疫磁珠加入到第1步結合了1抗的待檢樣品，充分混合震蕩，抓取目標菌后通過施加外加磁場，則磁珠就匯集到磁場一邊，吸走上清液則分離出磁珠，若待檢樣本中有目標菌，目標菌首先與1抗結合形成1抗復合物，在加入2抗磁珠后，通過2抗與1抗的相互作用，從而捕獲1抗復合物，被磁珠所富集，加無菌的去離子水則形成目標菌的磁珠懸濁液；

5）將富集的磁珠懸濁液加到第3步固定了1抗的單克隆抗體的固相載體上，若待檢樣品中存在目標菌則形成雙抗夾心，用無菌的去離子水清洗，則沒有抓取到目標菌的磁珠就被洗掉，若不存在目標菌，則所有磁珠都被洗掉；

6）之后，用洗脫劑將固定板上的雙抗夾心的磁珠洗下來，用外加磁場分離磁珠的方法用無菌的去離子水清洗掉離子和溶劑，如果還存在磁珠就是抓到目標菌的磁珠；

7）這部分磁珠，加入分析純的硝酸和硫酸進行硝化反應，使磁珠γ-Fe₂O₃轉變為三價鐵離子和二價鐵離子，中和過量酸后通過檢測方法檢測出鐵離子的量，從而可以算出磁珠的量，通過加標定量磁珠而在一定程度間接定量出目標菌的量。

2.如權利要求1所述的一種基于γ-Fe₂O₃納米粒子間接富集免疫磁分離的致病菌檢測方法，其特征在于制作所述納米探針的核材為γ-Fe₂O₃納米粒子，納米粒徑小于1000納米。

3.如權利要求1所述的一種基于γ-Fe₂O₃納米粒子間接富集免疫磁分離的致病菌檢測方法，其特征在于所述1抗指目標菌單克隆抗體，2抗指第1抗體的抗體，為單克隆或多克隆抗體。

4.如權利要求1所述的一種基于γ-Fe₂O₃納米粒子間接富集免疫磁分離的致病菌檢測方法，其特征在于所述檢測方法為鄰二氮菲吸光光度法或硫氰酸鉀比色法。