[發(fā)明專利]Isl1基因及其表達(dá)產(chǎn)物在促進(jìn)HCN4表達(dá)中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310326495.2
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN104338149B
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫云甫;梁興群
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市東方醫(yī)院（同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院）
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K38/17;G01N33/68;C12N5/10;C07K14/47;A01K67/02;A61P9/06
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;劉真真

1.一種LIM同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子(LIM?homeodomain?transcription?factor，Islet1，Isl1）基因、蛋白或其促進(jìn)劑的用途，其特征在于，用于制備促進(jìn)HCN4基因或蛋白表達(dá)的藥物組合物，或用于制備HCN4（超極化激活性環(huán)核苷酸門控性通道4，hyperpolarization-activated?cyclic?nucleotide-gated?channel?4）的轉(zhuǎn)錄激活劑。

2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的Isl1基因或蛋白來自于哺乳動物，更佳地來源于小鼠、大鼠或人。

3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的Isl1基因、蛋白或其促進(jìn)劑包括的Isl1基因表達(dá)產(chǎn)物、促進(jìn)型microRNA、促進(jìn)型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子、或促進(jìn)型靶向小分子化合物。

4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物組合物包括所述Isl1基因、蛋白或其促進(jìn)劑以及藥學(xué)上可接受的載體。

5.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的竇房結(jié)細(xì)胞異常相關(guān)疾病包括：病竇綜合征或心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)相關(guān)心律失常。

6.一種用于促進(jìn)HCN4基因或蛋白表達(dá)的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物含有Isl1基因、蛋白或其促進(jìn)劑以及藥學(xué)上可接受的載體。

7.一種篩選用于促進(jìn)HCN4基因或蛋白表達(dá)和/或活性的化合物的方法，其特征在于，包括步驟：

(i)在實驗組，向細(xì)胞培養(yǎng)體系中添加測試化合物，并測定細(xì)胞培養(yǎng)體系中Isl1表達(dá)量和/或活性；在對照組，向相同的細(xì)胞培養(yǎng)體系中不添加測試化合物，并測定細(xì)胞培養(yǎng)體系中Isl1表達(dá)量和/或活性；

其中，如果實驗組中的Isl1表達(dá)量和/或活性大于對照組，則說明該測試化合物為用于促進(jìn)HCN4基因或蛋白表達(dá)和/或活性的化合物。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，還包括步驟：

(ii)對(i)中獲得的化合物，進(jìn)一步測定其對HCN4表達(dá)量和/或活性的促進(jìn)作用；其中，如果實驗組中HCN4的表達(dá)量和/或活性明顯大于對照組，則說明該化合物為用于促進(jìn)HCN4基因或蛋白表達(dá)和/或活性的化合物。

9.一種基因重組的動物細(xì)胞，其特征在于，所述動物細(xì)胞含有一誘導(dǎo)型表達(dá)盒，所述誘導(dǎo)型表達(dá)盒包括誘導(dǎo)型啟動子，以及與所述誘導(dǎo)型啟動子操作性連接的Isl1編碼序列和終止密碼子，從而可以在誘導(dǎo)條件下表達(dá)所述的Isl1蛋白，并且Isl1蛋白表達(dá)量與誘導(dǎo)條件相關(guān)；

并且，所述動物細(xì)胞不是組成型表達(dá)Isl1編碼序列的細(xì)胞。

10.一種體外非治療性的處理方法，其特征在于，包括步驟：

(a)在一定濃度的誘導(dǎo)劑存在下，培養(yǎng)權(quán)利要求9所述的基因重組的動物細(xì)胞，從而誘導(dǎo)所述動物細(xì)胞中表達(dá)Isl1蛋白；和

(b)檢測所述動物細(xì)胞中蛋白的表達(dá)情況和/或活性水平。

11.一種構(gòu)建心臟病模型動物的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)提供一動物細(xì)胞，所述動物細(xì)胞不是組成型表達(dá)Isl1編碼序列的細(xì)胞，并且所述動物細(xì)胞含有一誘導(dǎo)型表達(dá)盒，所述誘導(dǎo)型表達(dá)盒包括誘導(dǎo)型啟動子，以及與所述誘導(dǎo)型啟動子操作性連接的Isl1編碼序列和終止密碼子，從而可以在誘導(dǎo)條件下表達(dá)所述的Isl1蛋白，并且Isl1蛋白表達(dá)量與誘導(dǎo)條件相關(guān)；和

(b)將所述動物細(xì)胞再生成動物，從而制得心臟病模型動物。