[發(fā)明專利]一種鑒定乳鴿性別的PCR方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310325349.8
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN103397091A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李世軍;陽春義;周偉;龔炎長;王一葦;熊曉寒;陳思;徐子賀
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 余曉雪;王敏鋒

1.一種用于鑒定乳鴿性別的引物對，其特征在于如序列表中SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列。

2.一種鑒定乳鴿性別的PCR試劑，由權(quán)利要求1所述的引物對、dNTP、DNA聚合酶、10*PCR緩沖液和鎂離子組成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的PCR試劑，其特征在于，所述引物對中各引物在所述的PCR試劑終濃度均為0.2μM，所述dNTP在所述的PCR試劑中的濃度為1mM，所述DNA聚合酶在所述的PCR試劑中的濃度為0.05IU/μl，所述鎂離子在所述的PCR試劑中的濃度為2.0mM。

4.含有權(quán)利要求2或3所述的PCR試劑的試劑盒。

5.權(quán)利要求1所述的引物對、權(quán)利要求2或3所述的試劑或權(quán)利要求4所述試劑盒在鑒定乳鴿性別中的應(yīng)用。

6.一種鑒定乳鴿性別的方法，其特征在于，包括以下步驟：用權(quán)利要求1所述的引物對或權(quán)利要求2或3所述的試劑或權(quán)利要求4所述的試劑盒中的引物對對待鑒定乳鴿的羽毛毛球基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，檢測所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，若所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有大小分別為338bp和318bp的片段，則所述待鑒定乳鴿為雌性，若所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有大小為338bp的片段而且不含有大小為318bp的片段，則所述待鑒定乳鴿為雄性。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的鑒定乳鴿性別的方法，其特征在于，所述羽毛毛球基因組DNA的提取方法如下：1）：毛球DNA提取緩沖液終濃度配比：KCl50mM；Tris-HCl(pH8.3)10mM；MgCl₂2.0mM，蛋白酶K20μg/ml；2）羽毛毛球樣本處理：樣本采集到達(dá)實驗室后，立即用手術(shù)刀切1～1.5mm的毛球薄片，放入事先加入90μL上述毛球DNA提取緩沖液的96孔PCR板中，毛球薄片集滿一板96個樣品后，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心2分鐘；3）消化滅活：用PCR儀65℃60分鐘消化，95℃，15分鐘滅活蛋白酶K，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心2分鐘，上清即為羽毛毛球基因組DNA，取上清1.2μl用于PCR擴(kuò)增，其余貯存在-20℃?zhèn)溆谩?/p>

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增中，以待鑒定乳鴿的羽毛毛球基因組DNA為DNA模板；所述PCR擴(kuò)增的退火溫度為55℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中，所述338bp片段為序列表中SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸，所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中，所述318bp片段為序列表中SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，檢測所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的方法為瓊脂糖凝膠電泳。