[發明專利]一種碎米花組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310324415.X
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN103371102A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 朱春艷;朱丹華;余金良;呂敏;顧宏輝
• 申請（專利權）人: 杭州植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，特別是涉及杜鵑花科杜鵑花屬中碎米花的快速繁殖方法。

背景技術

碎米花（Rhododendron?spiciferum?Franch.），為杜鵑花科杜鵑花屬糙葉杜鵑亞屬糙葉杜鵑組，常綠小灌木，自然分布于四川西南、貴州西部、云南中部至東南部等，生于山坡灌叢、松林或次生林緣。碎米花幼枝有柔毛或糙硬毛，葉通常兩面或至少上面被毛和鱗片?；ㄐ蛞干谥?，花萼發育有明顯裂片或淺杯狀無裂片；花冠筒狀或漏斗狀，白色、粉紅色至深紅色。該野生種株小花密，易于引種馴化，適應性強，在園林綠化及盆栽中具有較大應用潛力。此外碎米花根還能作治療風濕性關節炎和跌打損傷外用藥。

對碎米花的繁殖方法鮮見有研究，一般采取種子繁殖或扦插的方法。張長芹對碎米花的種子繁殖進行過報道（云南植物研究，1992，14（1）：87-91），但種子繁殖方法生產的植株需要很多年才能開花，且前期生長速度慢。未見有扦插繁殖方面的報道，更未見通過組培方法快速繁殖碎米花的方法。

組培快繁技術是實現對碎米花大規模繁殖的重要途徑，可以減少對野生資源的破壞，加快野生杜鵑的馴化進程及園林上的應用。本發明碎米花利用已開花的母株莖段為外植體，建立了高效的組培快繁體系，其培育的組培苗生長健壯，繼代周期短，瓶外生根后能當年實現開花。國內未見有對碎米花組培成功的報道。

發明內容

為了解決上述的技術問題，本發明的一個目的是建立一種有效的碎米花組織培養快速繁殖方法，并利用此方法進行快速低成本生產組培苗，為碎米花的組培苗工廠化生產提供技術支撐。本發明的另外一個目的是提供上述的碎米花組織培養快速繁殖培養基。

為了實現上述的第一個目的，本發明目的通過以下技術方案來實現。

一種碎米花組織培養快速繁殖方法，該方法包括以下的步驟：

1）外植體的選擇：春季從已開花碎米花母株上剪取帶有潛伏芽的新發枝條；

2）外植體滅菌：剪去枝條葉片，先用自來水浸泡并沖洗10-20分鐘，用洗潔精洗滌1-2次后吸干；然后，用無菌水沖洗3-5遍，再用0.1％氯化汞消毒8-12分鐘，最后用無菌水沖洗3-5遍后吸干；

3）腋芽誘導培養：將滅好菌的枝條切除莖尖，余下的枝條剪成2-3cm長的莖段，每段帶有1-2個腋芽，斜插入誘導培養基中；于23-26℃，光16小時，黑8小時，培養3-5周后，莖段潛伏芽發育生長出新枝條至2-4cm長；所述的誘導培養基由以下組分構成：WPM或Anderson基本培養基?+?ZT?1.0-2.0?mg/L?+?NAA0.05-0.1?mg/L?+?20?g/L?蔗糖或白糖?+?6-10?g/L?瓊脂，pH4.8-5.2，高溫滅菌；

4）增殖培養：剪取新長出的枝條，去頂芽后插入增殖培養基中，于23-26℃，光16小時，黑8小時，培養4-6周后，莖段長出叢生芽；此階段可重復進行；所述的增殖培養基由以下組分構成：?WPM或Anderson基本培養基?+?ZT?0.5-1.0?mg/L?+?NAA?0.05-0.1mg/L?+?20g/L?蔗糖或白糖?+?6-10?g/L?瓊脂，pH?4.8-5.2，高溫滅菌；

5）壯苗培養：將長到1-2cm長的叢生芽剪切移入壯苗培養基中，于23-26℃，光16小時，黑8小時，培養2-4周，待長到3-5cm后移入基質中，進行瓶外生根；所述的壯苗培養基由以下組分構成：WPM或Anderson基本培養基+?ZT?0.25-0.5?mg/L?+?NAA0.01-0.05?mg/L?+?20g/L?蔗糖或白糖?+?6-10?g/L?瓊脂，pH?4.8-5.2，高溫滅菌；

6）瓶外生根：在每年10至次年3月，將長到3-5?cm高的瓶苗在室外放置1周，洗去枝條上的瓊脂后移入含有含泥炭：珍珠巖：蛭石體積比2：1：1的基質中，在保濕保溫條件下生長，1-2個月后生根。

為了實現上述的第二個目的，本發明目的通過以下技術方案來實現。

一種碎米花組織培養快速繁殖培養基，該培養基由以下組分構成：WPM或Anderson基本培養基+?ZT?0.25-2.0?mg/L?+?NAA0.01-0.10?mg/L?+?20g/L?蔗糖或白糖?+?6-10?g/L?瓊脂，pH?4.8-5.2。

作為優選，該培養基由以下組分構成：WPM或Anderson基本培養基?+?ZT?1.0-2.0?mg/L?+?NAA0.05-0.1?mg/L?+?20?g/L?蔗糖或白糖?+?6-10?g/L?瓊脂，pH4.8-5.2。