[發明專利]一種生產瑞替普酶的發酵培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 201310323514.6
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN104342421B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 竇啟玲
• 申請（專利權）人: 貴州益佰制藥股份有限公司
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明涉及一種用于生產瑞替普酶的發酵培養基及其制備方法，屬于微生物發酵工程領域。

背景技術

現今心腦血管疾病已是人類健康的最大威脅之一，患病人數逐年上升，而且發病年齡也越發年輕化，田文靜等在“乳糖誘導瑞替普酶在大腸桿菌中的可溶性表達”（中國生化藥物雜志,?2011,?32(5)）一文中指出全世界每年心血管疾病患者多達1300萬。在中國，每年需要進行腦梗塞、心肌梗塞等血栓類疾病治療的人數就上百萬，因此研制和生產高效的溶栓藥就顯得十分必要。趙友春等在“第三代溶血栓藥物研究進展”（藥學進展,?2004,?28(2):?72-75）中介紹到，目前溶栓藥物已發展到第三代，具有快速溶栓，治愈率高，半衰期長，副作用小等優點，在臨床上具有較強的競爭性，但價格也比較昂貴，所以，生產出低成本的溶血栓藥物具有顯著的經濟效益和重大的社會意義。另外，趙友春等在“提高溶栓新藥瑞替普酶生產得率的中試研究”（化工科技,?2003,?11(1):?15-17）一文中報道，目前多數是對瑞替普酶菌株的構建和復性純化研究，而鮮有報道實際生產中是如何進行菌株工業化發酵生產?，F有技術中，瑞替普酶的工業生產中主要采用大腸桿菌進行培養，采用更有效的培養技術來提高菌體的發酵密度，能夠提供產物的產率，而選擇合適的發酵培養基，不僅可以減少培養體積，強化下游分離提取，還可以縮短生產周期，減少設備投資，從而降低生產成本，極大地提高產品的市場競爭力。

發明內容

因此，本發明的目的是提供一種用于生產瑞替普酶的培養基。

本發明的另一目的是提供上述用于生產瑞替普酶的培養基的制備方法。

為達到上述目的，本發明的技術方案是：

一種用于生產瑞替普酶的發酵培養基，主要由KH₂PO₄、K₂HPO₄?·2H₂O、(NH4)₂SO₄、FeSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O、CoCl₂·6H₂O、CuSO₄·5H₂O、MnSO₄·H₂O、Na₂MoO₄·2H₂O、20%酪蛋白、MgSO₄、卡那霉素、葡萄糖、檸檬酸、消泡劑、酵母提取物和H₂O組成，其中培養基的主要組成為：

A液：每升H₂O中含KH₂PO₄??25-40g、K₂HPO₄?·2H₂O?57.5-80g、(NH4)₂SO₄?17.5-25.8g、FeSO₄·7H₂O??0.008-0.015g；

B液：每升H₂O中含CaCl₂·2H₂O?0.8-1.6g、CoCl₂·6H₂O??1.60-2.93g、CuSO₄·5H₂O?1.5-2.5g、FeSO₄·7H₂O??1.80-2.87g、MnSO₄·H₂O?1.0-1.93g、Na₂MoO₄·2H₂O?1.60-2.67g；

C液：每升H₂O中含20%酪蛋白25.0-42.0ml、1M?MgSO₄?16.0-37.0ml、50mg/ml卡那霉素10.0-23.5ml、70%葡萄糖772.5-867.5ml、40%(NH₄)₂SO₄?80-120ml、5%檸檬酸1.5-5.0ml。

優選地，上述用于生產瑞替普酶的發酵培養基，其中培養基的主要組成為：